細(xì)胞：mMSCs細(xì)胞
中文名稱：小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞
生長(zhǎng)特性：貼壁細(xì)胞
培養(yǎng)基：DMEM-H +10%FBS(GIBCO胎牛血清)
凍存條件：50%基礎(chǔ)培養(yǎng)基、40% FBS、10% DMSO
細(xì)胞常規(guī)培養(yǎng)傳代流程( 請(qǐng)嚴(yán)格遵照無菌操作)
1. 吸出原培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，PBS 緩沖液潤(rùn)洗細(xì)胞兩次，加 2-3 ml 0.25% 胰_酶進(jìn)行消化細(xì)胞(注意把握消化時(shí)間，通?？刂圃?1-2min)
2. 鏡下觀察消化情況，在細(xì)胞邊緣縮小，貼壁松動(dòng)時(shí)(不建議消化到細(xì)胞漂浮)去掉胰_酶，加 6~8ml 培養(yǎng)基，輕輕吹打細(xì)胞層，盡量把細(xì)胞層吹落，吹散。
3. 取部分細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)皿/瓶中，添加適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基，把細(xì)胞懸液打勻，于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
4. 注意培養(yǎng)基 PH 值變化情況，定期換液(每周 2-3 次)，待細(xì)胞密度達(dá)到 80%以后重復(fù) 1 項(xiàng)操作或凍存。
(網(wǎng)絡(luò)信息主針對(duì)網(wǎng)絡(luò)推廣作用，僅供參考，細(xì)胞培養(yǎng)請(qǐng)咨詢細(xì)胞庫(kù)管理員，以細(xì)胞庫(kù)管理員提供給您的信息為準(zhǔn)，操作前，如果有不明白之處，先咨詢細(xì)胞庫(kù)管理員，避免不必要的損失；)
內(nèi)皮抑素(endostatin)一種具有抑制血管生長(zhǎng)的蛋白質(zhì).
休眠蛋白(restin)是內(nèi)皮抑素的同源蛋白質(zhì),它來源于膠原蛋白XV的羧端非膠原蛋白結(jié)構(gòu)域(NC1)。
為了研究鼠源休眠蛋白對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)的影響, 利用RT-PCR從鼠肌肉中擴(kuò)增出它的基因, 克隆入原核表達(dá)載體pQE32。
誘導(dǎo)后, 重組蛋白質(zhì)以包涵體形式高效表達(dá), 表達(dá)量約占菌體總蛋白質(zhì)的60%～70%。
重組蛋白質(zhì)經(jīng)純化復(fù)性后, 可以特異地抑制bFGF刺激的牛主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞的增殖, 但是休眠蛋白的抑制活性比內(nèi)皮抑素活性稍低.
流式細(xì)胞儀檢測(cè)發(fā)現(xiàn), 休眠蛋白可以引起內(nèi)皮細(xì)胞的細(xì)胞周期的改變, 并且引起細(xì)胞凋亡。
