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GAPDH (甘油醛-3-磷酸脫氫酶) 是參與糖酵解的一種關(guān)鍵酶,由4個(gè)36 kDa 的亞基組成。除參與糖酵解外,有證據(jù)表明哺乳動(dòng)物細(xì)胞中的GAPDH參與了多種胞內(nèi)生化過(guò)程,包括膜融合 (membrane fusion)、微管成束 (microtubule bundling)、磷酸轉(zhuǎn)移酶 (phosphotransferase)激活、核內(nèi)RNA出核、DNA復(fù)制與DNA修復(fù)等。GAPDH蛋白幾乎在所有組織中都高水平表達(dá),常用于Western Blot檢測(cè)中校正系統(tǒng)的內(nèi)參。
Tubulin即微管蛋白,是細(xì)胞的一種骨架蛋白。Tubulin分為α、β、γ、δ、ε等多種tubulin,其中Alpha Tubulin和Beta Tubulin可以形成異源二聚體,是形成微管的zui主要的兩種Tubulin。Alpha tubulin和Beta tubulin分子量分別為55kDa和50kDa,其實(shí)際檢測(cè)條帶均在55kDa左右。作為內(nèi)參,alpha tubulin的蛋白水平通常不會(huì)發(fā)生改變,因此被廣泛用于Western Bloting時(shí)上樣量是否一致的參照,也常被用于免疫染色觀察細(xì)胞的微管結(jié)構(gòu)。需要注意的是,在脂肪細(xì)胞內(nèi),alpha tubulin的表達(dá)量較少。
Actin是細(xì)胞骨架的主要成分,廣泛表達(dá)于真核細(xì)胞。目前發(fā)現(xiàn)Actin至少存在6種異構(gòu)體形式,主要分布在心肌、骨骼橫紋肌和平滑肌組織中,調(diào)控細(xì)胞的收縮能力,也表達(dá)于非肌肉細(xì)胞,調(diào)節(jié)細(xì)胞結(jié)構(gòu)和活力。β-Actin分子量為43 kDa,具有高度保守性,在細(xì)胞中的表達(dá)相對(duì)穩(wěn)定,因此它常被用于校正系統(tǒng)的內(nèi)參。
內(nèi)參抗體包括beta-actin、beta-Tubulin、GAPDH等,性能穩(wěn)定,質(zhì)量可靠,可長(zhǎng)期穩(wěn)定儲(chǔ)存,可在進(jìn)行Western blot實(shí)驗(yàn)時(shí)檢測(cè)目的產(chǎn)物、校正上樣誤差,也可作為空白對(duì)照,檢測(cè)蛋白轉(zhuǎn)膜是否*、整個(gè)顯色或者發(fā)光體系是否正常。
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