Protein A是一種金黃色葡萄球菌細(xì)胞壁蛋白質(zhì)，能夠特異性地結(jié)合多種免疫球蛋白的Fc區(qū)段，與瓊脂糖凝膠以一定的方式結(jié)合，可用于抗體純化的親和填料。本產(chǎn)品純化過程條件溫和，對蛋白的活性影響小，可從腹水，血清，細(xì)胞培養(yǎng)上清或細(xì)胞抽提物中分離和純化多種哺乳動(dòng)物不同類及亞類的抗體或包含抗體Fc片段的基因工程重組蛋白。Protein A經(jīng)過基因改造，除去了一些不重要的非結(jié)合域（如白蛋白特異性結(jié)合位點(diǎn)），能特異性地與人和哺乳動(dòng)物抗體（主要是IgG）的Fc區(qū)結(jié)合，而不影響Fab片段和抗原的結(jié)合，大大提高了抗體的純度 。

使用步驟： 

（1）緩沖液的準(zhǔn)備： 

結(jié)合緩沖液：大部分種類的IgG同蛋白A在中性條件下結(jié)合

洗脫緩沖液： 0.1M 甘氨酸緩沖液 pH 3.0，或0.1M檸檬酸鈉緩沖液pH 3.0

再生緩沖液：同洗脫緩沖液

中和緩沖液：1M Tris-HCl，pH 9.0

對于某些吸附載量較少的抗體，可適當(dāng)向結(jié)合緩沖液多添加NaCl（可達(dá)3M）和/或提高pH值（可達(dá)8.2），以提高介質(zhì)對抗體的吸附力。但是有時(shí)高pH會使雜蛋白吸附增加，使用者應(yīng)根據(jù)實(shí)際使用狀況適當(dāng)調(diào)節(jié)。不同的免疫球蛋白對蛋白A的吸附能力是不同的，即使是同一種屬、同一亞類的不同免疫球蛋白也有所差別，洗脫吸附較強(qiáng)的IgG時(shí)，洗脫液的pH值可能要降低到3.0以下。

以上緩沖液使用前均需0.45μm濾膜過濾。

（2）樣品的準(zhǔn)備

樣品經(jīng)硫酸銨粗提后，用結(jié)合緩沖液稀釋5~10倍，以保證樣品液的成分及pH和結(jié)合緩沖液接近。若上樣體積過大，可以采取調(diào)節(jié)樣品pH和鹽濃度的方式，使樣品中的緩沖體系與結(jié)合緩沖液相同。細(xì)胞培養(yǎng)液中大量的血清蛋白會對親和層析造成一定的干擾，去血清處理或稀釋樣品將提高純化抗體收率。

樣品在上柱前需0.45μm微孔濾膜過濾。

（3）操作步驟

a） 平衡：填料裝柱后，用結(jié)合緩沖液洗5-10個(gè)柱床體積洗掉乙醇并平衡柱子。

b） 上樣：將樣品上柱，上樣流速≤60cm/h。

c） 清洗：平衡緩沖液洗5~10個(gè)柱床體積，直至UV洗至基線。

d） 洗脫：洗脫緩沖液洗脫，收集洗脫峰，洗脫液立即用中和緩沖液中和到中性,濃縮到所需體積，加入50%甘油；測定效價(jià)后，分裝并保存在-20℃，避免凍結(jié)。

e） 再生：再生緩沖液流洗2~3個(gè)柱床體積。

f） 保存：先后用結(jié)合緩沖液、20%乙醇分別流洗3~5個(gè)柱床體積。兩端封閉，置于+4~8℃保存。