一般來(lái)說(shuō),胰島素ELISA試劑盒曲線上的zui小濃度是比較準(zhǔn)確的,低于這個(gè)值因?yàn)榕c曲線是個(gè)“S“型結(jié)構(gòu)有關(guān)
胰島素是由胰臟內(nèi)的胰島β細(xì)胞受內(nèi)源性或外源性物質(zhì)如葡萄糖、乳糖、核糖、精氨酸、胰高血糖素等的刺激而分泌的一種蛋白質(zhì)激素。胰島素是機(jī)體內(nèi)降低血糖的激素,同時(shí)促進(jìn)糖原、脂肪、蛋白質(zhì)合成。外源性胰島素主要用來(lái)糖尿病治療。
一般來(lái)說(shuō),胰島素ELISA試劑盒曲線上的zui小濃度是比較準(zhǔn)確的,低于這個(gè)值因?yàn)榕c曲線是個(gè)“S"型結(jié)構(gòu)有關(guān),所以結(jié)果是有偏差的,是一種估算。再加上實(shí)驗(yàn)誤差,所以達(dá)不到理想的效果。建議選擇試劑盒時(shí),應(yīng)該看曲線上zui小的濃度值,而不是試劑盒上寫的靈敏度。
雖然酶活性調(diào)節(jié)ELISA方法的靈敏度目前并不十分理想,但在酶活性放大ELISA中,檢測(cè)的靈敏度遠(yuǎn)比RIA高。根據(jù)質(zhì)量作用定律。即免疫反應(yīng)所形成的免疫復(fù)合物量與反應(yīng)物濃度成正比。推測(cè)所檢測(cè)的待測(cè)物分子數(shù)為1。已知1個(gè)摩爾濃度含6.02×1023個(gè)分子,那么理論推測(cè)酶活性放大ELISA方法的zui低檢測(cè)限可達(dá)1.7×10-24mol/L。
雖然在實(shí)際應(yīng)用中由于反應(yīng)條件和試劑純度以及儀器精度等因素的影響,往往達(dá)不到這個(gè)水平(大于104個(gè)分子),但表明ELISA在靈敏度方面的改進(jìn)潛力是很大的。
胰島素elisa試劑盒樣品收集、處理及保存方法:
1)血清-----操作過(guò)程中避免任何細(xì)胞刺激。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管。收集血液后,1000×g離心10分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。
2)血漿-----EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測(cè)。1000×g離心30分鐘去除顆粒。
3)細(xì)胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
4)組織勻漿-----將組織加入適量生理鹽水搗碎。1000×g離心10分鐘,取上清液
5)保存------如果樣品不立即使用,應(yīng)將其分成小部分-70℃保存,避免反復(fù)冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒,檢測(cè)前先離心或過(guò)濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。