TNF-a elisa試劑盒采用雙抗體夾心ELISA法。用抗人TNF-α抗體包被于酶標(biāo)板上，實(shí)驗(yàn)時(shí)樣品或標(biāo)準(zhǔn)品中的人TNF-α會(huì)與包被抗體結(jié)合，游離的成分被洗去。依次加入生物素化的抗人TNF-α抗體和辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的親和素?？谷薚NF-α抗體與結(jié)合在包被抗體上的人TNF-α結(jié)合、生物素與親和素特異性結(jié)合而形成免疫復(fù)合物，游離的成分被洗去。加入顯色底物(TMB)，TMB在辣根過(guò)氧化物酶的催化下呈現(xiàn)藍(lán)色，加終止液后變成黃色。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)處測(cè)OD值，TNF-α濃度與OD450值之間呈正比，通過(guò)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出樣品中TNF-α的濃度。

TNF-a elisa試劑盒構(gòu)成：

96/48微孔板(1塊,已包被抗小鼠TNF-a單抗)、樣品稀釋液(1瓶)、*抗體工作液(1瓶)、酶標(biāo)抗體工作液(1瓶)、底物稀釋液(1瓶)、終止液(1瓶)、洗滌液(20×,1瓶)、標(biāo)準(zhǔn)品(2000 pg/ml,2管,凍干粉)、OPD片(3片)、坐標(biāo)紙(1張)。

TNF-a elisa試劑盒操作步驟：

1、設(shè)立標(biāo)準(zhǔn)孔8孔(根據(jù)樣品蛋白濃度可調(diào)整為6孔),每孔中先各加入樣品稀釋液100 ul,*孔再加標(biāo)準(zhǔn)品100 ul,混勻后用移液器吸出100 ul,移至第二孔,如此反復(fù)作對(duì)倍稀釋至第7孔,后,從第7孔中吸出100 ul棄去,使之體積均為100 ul。第8孔為空白對(duì)照。

2、加樣:待測(cè)樣品孔中每孔各加入待測(cè)樣品100ul。

3、將反應(yīng)板置于37 ℃×120 min。

4、洗板:用洗滌液將反應(yīng)板充分洗滌4-6次,向?yàn)V紙上扣干。

5、每孔中加入*抗體工作液50ul。

6、將反應(yīng)板充分混勻后置37 ℃×60 min。

7、洗板:用洗滌液將反應(yīng)板充分洗滌4~6次,向?yàn)V紙上扣干。

8、每孔加酶標(biāo)抗體工作液100ul。

9、將反應(yīng)板置于37 ℃ 120 min。

10、洗板:用洗滌液將反應(yīng)板充分洗滌4~6次,向?yàn)V紙上扣干。

11、每孔中加入底物工作液100ul, 置于37 ℃暗處反應(yīng)5~10 min。

12、每孔中加入50ul終止液混勻。

13、用酶標(biāo)儀在492 nm處測(cè)吸光值。