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            Cyanine5-NHS ester的使用方法及操作步驟

西安凱新生物科技有限公司可為您提供zui全的Cyanine系列的活性熒光染料，其中Cyanine5-NHS染料可分為脂溶性的和連接磺酸基的suflo-Cyanine5-NHS ester的水溶性染料，訂購：

1、 稱取 0.1-0.5g 植物組織（如果是葉片，一般用 0.2g 即可；如果是含水分多的 果實(shí)，一般用 0.3-0.5g；如果是種子，一般用 0.1g 即可），放入液氮中研磨 成粉末。
2、 加入 1 mL 溶液 A，在冰上繼續(xù)研磨至成糊狀。注意：如果樣品富含蛋白酶， 還可以在溶液 A 中加入相應(yīng)的蛋白酶抑制劑（自備）。
3、 將研磨液轉(zhuǎn)移到一個(gè)干凈的 1.5mL 塑料離心管中，顛倒混勻后 4℃ 15000g 離心 15 分鐘。
4、 將上清液轉(zhuǎn)移到一個(gè)新的 1.5mL 塑料離心管中。
5、 加入 100 uL 溶液 B，顛倒混勻。
6、 在冰上放置 15 分鐘或在-20℃冰箱過夜。
7、 4℃ 15000g 離心 15 分鐘，小心移棄上清液。
8、 向沉淀物加入 1mL -20℃預(yù)冷的溶液 C，震蕩混合。
9、 4℃ 15000g 離心 10 分鐘，移棄上清液。
10、重復(fù)步驟 8 和 9 一次
11、加入 1mL -20℃預(yù)冷的溶液 D，震蕩混合后 4℃ 15000g 離心 10 分鐘，去 凈上清液。
12、冷凍干燥 1~2 分鐘，沉淀即可放冰箱保存或加入 200uL 自備的等電聚焦上樣 液在室溫下（溫度不要超過 30℃）溶解 30 分鐘，再室溫 10000g 離心 2 分 鐘，將上清液轉(zhuǎn)移到一個(gè)新的 1.5mL 塑料離心管中。后續(xù)試驗(yàn)包括 Bradford 蛋白定量和 2D 電泳。2D 電泳對(duì)蛋白上樣量要求十分嚴(yán)格，因此強(qiáng)烈建議用 戶在進(jìn)行 2D 電泳前測(cè)定所得蛋白的濃度。