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上海莼試生物技術(shù)有限公司
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歐洲放線菌探針法熒光PCR檢測(cè)試劑盒?實(shí)驗(yàn)過程
2022-9-27 閱讀(126)
歐洲放線菌探針法熒光PCR檢測(cè)試劑盒實(shí)驗(yàn)過程：
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2．對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此，擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1（10pM） 2μl
引物2（10PM） 2μ
Taq酶（2U/μl） 1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl） 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。
4．PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測(cè)
APG4B自噬相關(guān)蛋白4B抗體
alpha Actinin 4-Loading Controlα-輔肌動(dòng)蛋白4(內(nèi)參)抗體
Alkaline Phosphatase堿性磷酸酶抗體
AU1 tagAU1 tag標(biāo)簽抗體
AEBP1脂肪細(xì)胞增強(qiáng)結(jié)合蛋白1
AKT1蛋白激酶B
AKT1蛋白激酶B
ANGL2血管生成素樣蛋白2抗體
Angiopoietin 4血管生成素3/血管生成素4抗體
Annexin I膜粘連蛋白 I抗體
Annexin A2膜粘連蛋白 Ⅱ抗體
ATF1活化轉(zhuǎn)錄因子1抗體
Aquaporin 4 水通道蛋白4抗體
ATF2活化復(fù)制因子2抗體
AMPK beta 1腺苷單磷酸活化蛋白激酶β1抗體
Amylin糖尿病相關(guān)肽/胰島淀粉樣肽抗體
Angiotensin II血管緊張素Ⅱ抗體
AT2R血管緊張素Ⅱ受體1抗體
Angiopoietin-1血管生成素-1抗體
Annexin V膜粘連蛋白5抗體
Annexin V重組膜粘連蛋白5抗體
alpha Adaptin銜接蛋白α-Adaptin抗體
APAF1(CT)凋亡蛋白活性因子-1抗體（C端）
APAF1(NT)凋亡蛋白活性因子-1抗體（N端）
ABCG2三磷酸腺苷結(jié)合轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白G超家族成員2抗體
APOE載脂蛋白E抗體
