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泛素特異性蛋白酶Otubain2抗體的生w素化標記實驗要點
2023-1-10 閱讀(175)
泛素特異性蛋白酶Otubain2抗體的生w素化標記實驗要點:
1. 新型血小板相關(guān)內(nèi)皮分泌蛋白SCUBE1抗體費用 如在反應混合液中有疊氮鈉或游離氨基存在,會抑制標記反應。因此,蛋白質(zhì)在反應前要對 0.1mol/L碳suan氫鈉緩沖液或0.5mol/L硼酸緩沖液充分透析;
2.所用的NHSB及待生wu素化蛋白質(zhì)之間的分子比按蛋白質(zhì)表面的ε-氨基的密度會有所不同,選擇不當則影響標記的效率,應先用幾個不同的分子比來篩選最適條件;
3.用NHSB量過量也是不利的,抗原的結(jié)合位點可能因此被封閉,導致抗體失活;
4.由于抗體的氨基不易接近可能造成生wu素化不足,此時可加入去污劑如 Triton x-100, Tween20等;
5.當游離ε-氨基(賴氨酸殘基的氨基)存在于抗體的抗原結(jié)合位點時,或位于酶的催化位點時,生wu素化會降低或損傷抗體蛋白的結(jié)合力或活性;
6.生wu素還可能與不同的功能基團,如羰基、氨基、巰基、異咪唑基及ben酚基,也可與糖基共價結(jié)合;
7.交聯(lián)反應后,應充分透析,否則,殘余的生wu素會對生wu素化抗體與親和素的結(jié)合產(chǎn)生競爭作用;
8.在細胞的熒光標記實驗中,中和親和素的本底低,但由于鏈霉親和素含有少量正電荷,故對某些細胞可導致高本底。
小鼠血管緊張素轉(zhuǎn)化酶(mouse ACE)
小鼠雄激素結(jié)合蛋白(mouse ABP)
小鼠促腎上腺皮質(zhì)激素(mouse ACTH)
小鼠Active Caspase-3
小鼠Active Caspase-7
小鼠Active Caspase-8
小鼠激活素A(mouse Activin A)
小鼠脂聯(lián)素(mouse Adiponectin)
小鼠抗線粒體抗體(mouse AMA)
小鼠抗核抗體(mouse ANA)
小鼠血管緊張素II(mouse ANG II)
小鼠血管生成素-2(mouse Angiopoietin-2)
小鼠心鈉素(mouse ANP)
小鼠凋亡誘導因子(mouse AIF)
小鼠抗利尿激素/血管加壓素(mouse AVP/ADH)
小鼠醛固酮(mouse ALD)
小鼠白蛋白(mouse Albumin)
小鼠血管抑素(mouse Angiostatin)
小鼠載脂蛋白E(mouse APO E)
小鼠B淋巴細胞刺激因子(mouse BAFF)
小鼠凋亡因子BAX(mouse BAX)
小鼠細胞凋亡相關(guān)基因(mouse BCL-2)
小鼠腦衍化神經(jīng)營養(yǎng)因子(mouse BDNF)
小鼠腦衍化神經(jīng)營養(yǎng)因子受體(mouse BDNF R)
小鼠骨成型蛋白-2(mouse BMP-2)
小鼠骨成型蛋白-4(mouse BMP-4)
