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上海莼試生物技術(shù)有限公司
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人Dectin-1蛋白ELISA檢測試劑盒操作步驟
2021-9-28 閱讀(173)
1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋與加樣：在酶標(biāo)包被板上設(shè)標(biāo)準(zhǔn)品孔10孔，在di一、第二孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品100μl，然后在di一、第二孔中加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl，混勻；然后從di一孔、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl，混勻；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉，再各取50μl分別加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50ul，混勻；混勻后從第五、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl，混勻后從第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl，混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。（稀釋后各孔加樣量都為50μl，濃度分別為180 ng/L，120 ng/L ，60 ng/L，30 ng/，15 ng/L）。
2. 加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品最終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。
3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
4. 配液：將30（48T的20倍）倍濃縮洗滌液用蒸餾水30（48T的20倍）倍稀釋后備用。
5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl，空白孔除外。
7. 溫育：操作同3。
8. 洗滌：操作同5。
9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.
10. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。
11. 測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘。
人乳腺癌細(xì)胞；MCF 7B
人急性淋巴母細(xì)胞性白血病細(xì)胞；MOLT-4
人小細(xì)胞肺癌細(xì)胞；NCI-H209
黑人Burkitt淋巴瘤細(xì)胞；RAJI
人B淋巴細(xì)胞瘤細(xì)胞；RAMOS
人B淋巴細(xì)胞瘤細(xì)胞；RAMOS(RA.1)
人腦瘤細(xì)胞；SF126
人腦瘤細(xì)胞；SF763
人腦瘤細(xì)胞；SF767
人皮膚黑色素瘤細(xì)胞；SK-MEL-1
人腎上腺皮質(zhì)癌細(xì)胞；SW-13
人結(jié)直腸癌細(xì)胞；T84
人急性單核細(xì)胞白血病細(xì)胞；THP-1
人神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞瘤細(xì)胞；U251
人組織細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞；U937 [U-937]
人胃腺癌細(xì)胞；BGC-823
人低分化肺腺癌細(xì)胞；GLC-82 [GLC82]
人喉癌上皮細(xì)胞；Hep-2
人纖維肉瘤細(xì)胞；HT-1080
人絨癌細(xì)胞；JEG-3
人耐VP16絨癌細(xì)胞株；JEG-3/VP16
白介素-2轉(zhuǎn)染耐VP16絨癌細(xì)胞；JEG-3/VP16-IL-2
TNFa轉(zhuǎn)染耐VP16絨癌細(xì)胞；JEG-3-VP16-TNFa
人急性T淋巴細(xì)胞白血病細(xì)胞；Jurkat, Clone E6-1
人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞；BE(2)-M17
人乳腺癌細(xì)胞；MDA-MB-157
人成骨肉瘤細(xì)胞；MG-63
人小細(xì)胞肺癌細(xì)胞；NCI-H446
人多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞；RPMI-8226 [RPMI8826]
人腦瘤細(xì)胞；SF17
人乳腺癌細(xì)胞；SK-BR-3
人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞；SK-N-SH
人肝癌細(xì)胞；SMMC-7721
