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上海莼試生物技術有限公司
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怎樣才能讓大鼠elisa試劑盒系統(tǒng)更加穩(wěn)定
2017-9-4 閱讀(191)
大鼠elisa試劑盒檢測系統(tǒng)可謂是免疫學反應應用到科研中zui為靈敏的技術手段?？墒窃谛吕鲜植僮鬟^程中總是會出現(xiàn)或大或小的問題，很多人在剛開始做ELISA時就面臨很多困難，雖然有前任鋪路，但還是常常做得一塌糊涂，比如說花板，假陽性，全顯色，全部顯色，顯色比空白還低,科研人員也為此苦惱過很長一段時間，隨著自己技術水平得提高，或多或少地也掌握了ELISA體系的脾氣，也是熟能生巧吧，現(xiàn)在做方陣，做ELISA已是輕車熟路了，以前檢測一種抗體用整整一下午還算得暈暈的，現(xiàn)在給十個八個的從包被到顯色，一個工作日基本搞定。下面就由上海紀寧拋磚引玉地來說一下，做ELISA的經驗總結:
1、ELISA試劑盒包被原的性質很重要，蛋白濃度，是否降解，這關系到你做出的抗體可不可以被其識別，所以保存抗原很重要，我做重組蛋白時，師兄都嚴格警告我一定要在冰浴下緩慢融化就是這個道理。還有有的包被原可能不是蛋白，對于和脂類物質或小分子物質我們要事先對其改造再加以包被，我把方法簡要的列出如下:①親和素:先親和素先包被載體，加入化的DNA，這種包被方法均勻、牢固，已擴大應用于各種抗原物質的定量測定。②脂類物質:可將其在有機溶劑(例如乙醇)中溶解后加入ELISA板孔中，開蓋置冰箱guo ye或冷風吹干，待酒精揮發(fā)后，讓脂質自然干固在固相表面。③小分子必須依靠和大的蛋白載體偶聯(lián)后才能固定在固相載體上。
2、包被液的選擇，一般選擇ph9.6的碳酸鹽緩沖液。但有時由于試驗的需要，包被原的特殊性也可能采用中性的緩沖溶液來包。應注意以下原理：由于蛋白質與聚苯乙烯固相載體是通過物理吸附結合的，靠的是蛋白質分子結構上的疏水基團與固相載體表面的疏水基團間的作用，這種物理吸附是非特異性的，受蛋白質的分子量、等電點、濃度等的影響，大分子蛋白質較小分子蛋白質通常含有更多的疏水基團，故更易吸附到固相載體表面。具體的試驗還要有堅固的理論外也要實踐，看一下zui終可不可以應用到自己試驗當中去。常用的包被液除了剛才提到的pH9.6碳酸鹽緩沖液，還有pH7.2的磷酸鹽緩沖液和pH7-8的Tris-HCL緩沖液等等。
3、大鼠elisa試劑盒封閉：繼包被之后用高濃度的無關蛋白質溶液再包被的過程。封閉就是讓大量不相關的蛋白質充填這些空隙，從而排斥ELISA后的步驟中干擾物質的再吸附。常用封閉劑有：0.05%-0.5%的BSA;10%的小牛血清或1%明膠;脫脂奶粉，比較價廉，可以高濃度使用(5%-10%);還有一些稀有用到的各種動物血清(主要為了排除相似蛋白干擾)和酪蛋白等等。但zui終選用什么，要依據(jù)試驗具體來實踐。
Human IL-3 兔單抗 ELISA IL3 MAb
Human alpha-Galactosidase A / GLA 兔單抗 WB ELISA GLA MAb
Human FOLR2 兔單抗 ELISA FOLR2 MAb
Human DPP10 兔單抗 ELISA DPP10 MAb
Human Fractalkine / CX3CL1 兔單抗 ELISA CX3CL1 MAb
Human Cystatin S / CST4 兔單抗 ELISA CST4 MAb
Human Cystatin SA / CST2 兔單抗 ELISA CST2 MAb
Human CD131 / CSF2RB / IL3RB / IL5RB 兔單抗 ELISA CSF2RB MAb
Human Complement Factor H / CFH 兔單抗 ELISA CFH MAb
大鼠elisa試劑盒
