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上海莼試生物技術(shù)有限公司
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測(cè)定ABA含量，采用大鼠elisa試劑盒方法的的過程
2017-10-25 閱讀(577)
大鼠elisa試劑盒法的實(shí)驗(yàn)越來越廣泛的應(yīng)用，而現(xiàn)代的實(shí)驗(yàn)技術(shù)也在不同的發(fā)展，我公司每周都會(huì)有實(shí)驗(yàn)知識(shí)的，下面我們來看看測(cè)定ABA含量，采用ELISA方法的的過程。
1、包被：在微量滴定板內(nèi)準(zhǔn)確加入100μLABA包被液，37℃濕盒過一個(gè)晚上。
2、稀釋：取8支試管每管加150μLDB，管中加入50μL（2000ng/50μL）標(biāo)準(zhǔn)液，充分渦旋后，取50μL至第二號(hào)管中，同樣渦旋后，取50μL到第三管；依次稀釋到第六管，稀釋后的標(biāo)準(zhǔn)ABA依次為1000ng、500ng、250ng、125ng、62.5ng、31.25ng、15.625ng、7.8125ng/50μL。
3、洗板：從37℃濕盒中取出滴定板，恢復(fù)到室溫后，棄去包被液，用WB（洗滌緩沖液）洗滌三次，甩干（吸水紙）。
4、加樣：1～8孔對(duì)應(yīng)加入ABA標(biāo)樣50μL，10號(hào)孔相應(yīng)加入*濃ABA標(biāo)樣，9號(hào)孔加50μLDB，三排重復(fù)；然后每孔加50μL抗體，37℃ 45分鐘。
5、洗板
6、加酶標(biāo)二抗：每孔加100μL，37℃反應(yīng)1小時(shí)。
7、洗板
8、顯色：各孔加10μLOPD顯色液，37℃ 20分鐘。
9、終止反應(yīng)：各孔加50μL 6NH2SO4。
10、讀數(shù)：490nm讀取OD值。其中10號(hào)孔調(diào)零,而9號(hào)孔為值（B0）,1~8號(hào)孔的OD值為B。
11、結(jié)果計(jì)算：以In（B/B0）∕（1－B/B0）為縱坐標(biāo)，以標(biāo)準(zhǔn)ABA濃度的常用對(duì)數(shù)（lg［ABA］）為橫坐標(biāo)，繪制曲線。
這個(gè)方法是一種固相抗原型酶聯(lián)免疫法，先將ABA蛋白質(zhì)復(fù)合物與固相載體結(jié)合，然后將待測(cè)的ABA和兔抗ABA抗體加入微量滴定板的孔中，進(jìn)行競(jìng)爭(zhēng)反應(yīng)，接著棄去上清液，洗滌固相表面，加入酶標(biāo)二抗使其與結(jié)合在固相ABA上的抗體反應(yīng)，*后去除多余的未反應(yīng)的酶標(biāo)二抗，大鼠elisa試劑盒測(cè)定與固相結(jié)合的酶活性，酶活性和待測(cè)ABA含量呈負(fù)函數(shù)關(guān)系，即固相ABA結(jié)合的抗體與酶標(biāo)二抗量（OD或B%）隨待測(cè)ABA含量增加而減少,以一系列已知濃度的ABA的OD值制圖而獲得標(biāo)準(zhǔn)競(jìng)爭(zhēng)性抑制曲線，對(duì)于未知樣品B，只要在同樣條件下測(cè)定反應(yīng)后的OD值，就可以從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查到ABA的量。
Iohexol 66108-95-0 200mg 標(biāo)準(zhǔn)品
Iopamidol 60166-93-0 200mg 碘帕醇標(biāo)準(zhǔn)品
Iothalamic Acid 2276-90-6 200mg 碘他拉酸標(biāo)準(zhǔn)品
Ioversol 87771-40-2 200mg 碘氟醇標(biāo)準(zhǔn)品
Ipodate Sodium 1221-56-3 200mg 碘泊酸鈉標(biāo)準(zhǔn)品
Irbesartan 138402-11-6 200mg 標(biāo)準(zhǔn)品
Isocarboxazid 59-63-2 200mg 異卡波肼標(biāo)準(zhǔn)品
Isoflupredone Acetate 338-98-7 200mg 乙酸異氟潑尼龍標(biāo)準(zhǔn)品
Isomalt 64519-82-0 200mg 異麥芽酮糖醇標(biāo)準(zhǔn)品
大鼠elisa試劑盒
