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操作流程如下：

（1）待測(cè)樣品孔中每孔加入待測(cè)樣品100μl，每種樣品設(shè)3個(gè)平行孔；設(shè)兩個(gè)陰性對(duì)照孔，每孔加未處理組的細(xì)胞裂解液100μl；另設(shè)一個(gè)空白對(duì)照孔，加入純細(xì)胞裂解液100μl。

（2）酶標(biāo)板置4℃，包被過夜。

（3）洗板：吸干孔內(nèi)反應(yīng)液，用洗滌液過洗一遍（將洗滌液注滿板孔后，即甩去），之后將洗滌液注滿板孔，浸泡1-2分鐘，間歇搖動(dòng)。甩去孔內(nèi)液體后在吸水紙上拍干。重復(fù)洗滌3-4次。

（4）陰性對(duì)照孔每孔加入PBS 50μl，樣品孔及空白孔每孔加入1:500稀釋的兔抗人AIF抗體工作液50μl。

（5）酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi)，孵育60min。

（6）洗板，同（4）。

（7）每孔加1:5000稀釋的HRP-標(biāo)記的山羊抗兔抗體工作液 100μl。

（8）酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi)，孵育60min。

（9）洗板，同（4）。

（10）每孔加TMB顯色液 100μl，輕輕混勻10s，置37℃暗處反應(yīng)15-20min。

（11）每孔加100μl 2mol/L H2SO4終止反應(yīng)。

（12）分別測(cè)450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2，最終測(cè)得的OD值為兩者之差（W1-W2），以減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾。

（13）數(shù)據(jù)處理：在得出標(biāo)本（S）和陰性對(duì)照（N）的 OD值后，計(jì)算S/N值。S/N≥2.1為陽(yáng)性判定標(biāo)準(zhǔn)。

我司提供免費(fèi)代測(cè)服務(wù)，凡購(gòu)買我司試劑盒的用戶，只收取試劑盒的費(fèi)用,其他輔助試劑全部免費(fèi)。我們將根據(jù)實(shí)驗(yàn)工作量和難易程度，雙方協(xié)定實(shí)驗(yàn)周期，保質(zhì)保量完成委托實(shí)驗(yàn)，并將實(shí)驗(yàn)結(jié)果和材料用特快專遞免費(fèi)寄送到您手中。

從標(biāo)本收集、保存、預(yù)試驗(yàn)、實(shí)驗(yàn)、數(shù)據(jù)分析等全實(shí)驗(yàn)過程提供完整的技術(shù)指導(dǎo)。

公司采用的全是進(jìn)口原材料研，發(fā)靈敏性高，高效性，吸附均勻、吸附性好，回收利用率高、可靠性強(qiáng)，無效包退包換，公司提供免費(fèi)代測(cè)服務(wù)，各種種屬ELISA試劑盒產(chǎn)品齊全，質(zhì)量可靠。

實(shí)驗(yàn)室注意事項(xiàng)：

1、所有試劑不能與皮膚直接接觸。

2、務(wù)必使用潔凈的藥勺，量筒或滴管取用試劑，不準(zhǔn)用同一種工具同時(shí)連續(xù)取用多種試劑。

3、取完一種試劑后，應(yīng)將工具洗凈、擦干后，方可取用另一種試劑。

4、試劑取用后一定要將瓶塞蓋緊，不可放錯(cuò)瓶蓋和滴管，絕不允許張冠李戴，用完后將瓶放回原處。

5、已取出的試劑不能再放回原試劑瓶?jī)?nèi)。

實(shí)驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)品圖：

40 ng/L，5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品，150μl的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

20 ng/L，4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品，150μl的5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

10 ng/L，3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品，150μl的4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

5 ng/L，2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品，150μl的3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

2.5 ng/L，1號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品，150μl的2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

標(biāo)本的采集與保存：

1、血清：將收集于血清分離管的全血標(biāo)本在室溫放置2 小時(shí)或4oC 過夜，然后1000×g 離心20 分鐘，取上清即

可，或?qū)⑸锨逯糜?/span>-20oC 或-80oC 保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

2、血漿：用EDTA 或肝素作為抗凝劑采集標(biāo)本，并將標(biāo)本在采集后的30 分鐘內(nèi)于2-8oC 1000×g 離心15 分鐘，

取上清即可檢測(cè)，或?qū)⑸锨逯糜?/span>-20oC 或-80oC 保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

3、組織勻漿：

1） 取適量組織塊，于預(yù)冷PBS（0.01mol/L, pH 7.0-7.2）中清洗去除血液，稱重后備用（組織塊較大需先剪碎后再勻漿）；

2） 可同時(shí)選用多種勻漿方法達(dá)到較好的破碎效果：首先將組織塊移入玻璃勻漿器，加入5-10mL 預(yù)冷PBS 進(jìn)行充分研磨，該過程需在冰上進(jìn)行（有條件實(shí)驗(yàn)室可選用機(jī)器勻漿）；得到的勻漿液可再利用超聲破碎或反復(fù)凍融進(jìn)一步處理（超聲破碎過

試劑和樣本的控制方法：

一、試劑

1.試劑的選擇：國(guó)家明確要求要采用批批檢定的形式對(duì)ELISA試劑嚴(yán)格把關(guān)，我司嚴(yán)格按照國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行，已獲得國(guó)家承認(rèn)的“三證"，每一個(gè)產(chǎn)品都有對(duì)應(yīng)的批號(hào)，只要客戶提前下單，我們就能為您提供新批次的產(chǎn)品，不必?fù)?dān)心會(huì)有過期的試劑。我司的試劑，值得您選擇。

2.試劑的準(zhǔn)備：先將試劑盒先從冰箱中拿出來，在室溫下放置20-30 min后，再進(jìn)行測(cè)定，使試劑盒在使用前與室溫平衡，這樣做的目的能使反應(yīng)微孔內(nèi)的溫度較快地達(dá)到所需的溫度，以滿足后面的測(cè)定需求。

二、樣本

1.內(nèi)源性干擾因素：包括類風(fēng)濕因子、補(bǔ)體、高濃度的非特異免疫球蛋白、異嗜性抗體、某些自身抗體等；

類風(fēng)濕因子的控制方法：

①用F(ab)2替代完整的IgG；

②標(biāo)本用聯(lián)有熱變性IgG的固相吸附劑處理；

③檢測(cè)抗原時(shí)，可用加入到標(biāo)本稀釋液中使RF降解；

補(bǔ)體的控制方法：

①用EDTA稀釋標(biāo)本；

②56℃ 30 min加熱血清使C1q滅活；

2.外源性干擾因素：包括標(biāo)本溶血、細(xì)菌污染、保存時(shí)間過長(zhǎng)或凝固不全等；

控制方法：采血時(shí)規(guī)范操作，采集的血液勿用力震蕩，以防溶血；收集標(biāo)本時(shí)采用無菌試管，經(jīng)檢測(cè)后再低溫凍存；保存時(shí)間不宜過久，檢測(cè)時(shí)盡量采用新鮮標(biāo)本；對(duì)于凝固不全的血標(biāo)本可適當(dāng)加入抗凝劑，并放入37℃水中1 h，待充分凝固后再離心分離血清。

人中期因子Anti-PLCG2 AntibodyI型膠原蛋白檢測(cè)試劑盒

大鼠抗促甲狀腺素受體抗體Anti-PLCXD1 AntibodyI型膠原羥基端肽β降解產(chǎn)物檢測(cè)試劑盒

人BH3結(jié)構(gòu)域凋亡誘導(dǎo)蛋白Anti-PLD4 AntibodyI型原膠原N端前肽檢測(cè)試劑盒

小鼠甲狀腺球蛋白Anti-PLEKHG4 AntibodyJo1抗體;抗組氨酰tRNA合成抗體檢測(cè)試劑盒

小鼠抑制素AAnti-PLGRKT AntibodyKIT Ligand檢測(cè)試劑盒

大鼠兒茶酚Anti-PLG AntibodyKlotho蛋白檢測(cè)試劑盒

人B瘤因子2Anti-PLG AntibodyKlotho蛋白檢測(cè)試劑盒

大鼠白介素27Anti-PLK5 AntibodyL1粘附分子檢測(cè)試劑盒

INS胰島素酶聯(lián)免疫試劑盒3,5-二 97%Human macrophage stimulating protein,MSP ELISA Kit  人巨噬激蛋白兔乙酰受體抗體(AChRab)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒

1,4-二 99%Human mammalian target of rapamyein,mTOR ELISA Kit  人雷帕霉素靶蛋白兔紅膜蛋白(EMP)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒

1，2-二溴丁烷 98%Human Nuclear matrix protein 22,NMP-22 ELISA Kit  人核質(zhì)蛋白22兔巨噬集落激因子受體(MCSFR)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒

代二乙酯 純度 ≥90%Human cartilage oligomeric protein,COMP ELISA Kit  人軟骨寡聚蛋白兔V-Myc骨髓瘤病癌因同源物(MYC)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒

N,N-二乙酰 99%Human multidrug resistance-associated protein,MRP ELISA Kit   人多藥耐藥相關(guān)蛋白兔信號(hào)傳導(dǎo)轉(zhuǎn)錄激活因子5A(STAT5A)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒

二馬來酐 98%Human high mobility group protein 17,HMG-17 ELISA Kit  人高速泳動(dòng)蛋白17兔白介素3介導(dǎo)核因子(NFIL3)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒

2,6-二對(duì)醌 98%Human Vacuolating cytotoxin A,VacA ELISA Kit  人空泡素相關(guān)蛋白A兔τ-蛋白激1(τPK1)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒

1,3-二羥酮,二聚體 97%Human vitronectin,VNR ELISA Kit  人玻連蛋白/體外粘連蛋白兔神經(jīng)絲蛋白3(NEF3)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒

4,4'-二二 98%Human vimentin,VIM ELISA Kit  人波形蛋白兔髓樣前體抑制因子2(MPIF2)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒

2,5-二 98%Human Surfactant Protein D,SP-D ELISA Kit  人表面活性蛋白D兔纖α(FGα)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒

2,4-二磺，水合 98%Human arabinogalactan proteins,AGPs ELISA Kit  人阿拉伯半糖蛋白兔激肽原1(KNG1)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒

二乙二單 GR,99.0%Human Beta Lactoglobulin, Beta-Lg ELISA Kit  人β球蛋白兔結(jié)締組織生長(zhǎng)因子(CTGF)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒

二十二烷 standard for GC，≥99.0% (GC)Human Beta catenin, Beta-Cat ELISA Kit  人β連環(huán)蛋白/聯(lián)蛋白兔半凝集素7(GAL7)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒

二十二烷 99%Human Beta amyloid precursor protein, BetaAPP ELISA Kit  人淀粉樣前體蛋白兔因子受體(EGFR)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒

三十二烷 standard for GC, ≥98.0% (GC) Human beta2 glycoprotein, Beta2-GP ELISA Kit  人β2糖蛋白兔解整合素金屬蛋白10(ADAM10)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒