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參數(shù)規(guī)格：
產(chǎn)品名稱：鯊魚源性成分（Shark）PCR檢測(cè)試劑盒
產(chǎn)品貨號(hào)：CP99999
產(chǎn)品規(guī)格：50T
產(chǎn)品分類：熒光-PCR法
產(chǎn)品運(yùn)輸：低溫運(yùn)輸
產(chǎn)品保存：-20℃保存
產(chǎn)品有效期：一年
產(chǎn)品特點(diǎn)：本產(chǎn)品就是根據(jù)保守區(qū)設(shè)計(jì)引物而開發(fā)的高靈敏熒光定量 PCR 產(chǎn)品。
PCR反應(yīng)鑒定——PCR反應(yīng)條件:

實(shí)驗(yàn)過程：
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2．對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無(wú)到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此，擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
?
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。
      10×PCR buffer             5μl
      dNTP mixl                 4μl
      引物1（10pM）               2μl
      引物2（10PM）              2μl
      Taq酶（2U/μl）            1μl
      DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
     加ddH2O至               50 μl
     視PCR儀有無(wú)熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃保存。
4．PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測(cè)。
實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)：
1）RT-PCR可以檢測(cè)組織、細(xì)胞、血液、細(xì)菌等很多材料，不同的樣本有不同要求，實(shí)驗(yàn)前請(qǐng)充分溝通確認(rèn)實(shí)驗(yàn)方案和樣本情況；
2）客戶盡可能提供實(shí)驗(yàn)的背景信息、物種、基因準(zhǔn)確的名稱和ID號(hào)；
3）客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。
4）樣本保存于液氮或干冰，也可以保存于Trizol液中。
實(shí)時(shí)熒光定量PCR（quantitative real-time PCR，qPCR）是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程，最后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法。實(shí)時(shí)熒光定量PCR的化學(xué)原理包括探針類和非探針類兩類，探針類是利用與靶細(xì)胞序列特異性雜交的探針來(lái)指示擴(kuò)增產(chǎn)物的增加，非探針類是利用熒光染料或者特異性設(shè)計(jì)的引物來(lái)指示擴(kuò)增的增加。運(yùn)用該技術(shù)可以對(duì)DNA、RNA樣品進(jìn)行定量（包括定量和相對(duì)定量）和定性分析。
主要服務(wù)：DNA或RNA的定量分析、基因表達(dá)差異分析、基因分型。
主要技術(shù)：引物設(shè)計(jì)、RNA提取、cDNA合成、qPCR。
蘋果雙殼菌腫瘤新因子1抗體Human FAM57B ELISA Kit兔子熱休克蛋白27(HSPB1/HSP27)免疫試劑盒

亮白曲霉膽固25α7羥化酶抗體Human FAM65B ELISA Kit兔子缺血修飾白蛋白(IMA)免疫試劑盒

雷夫松氏菌角蛋白3+12抗體Human FAM175A ELISA Kit兔子橋粒糖蛋白2(DSC2)免疫試劑盒

白酒  酒精度接頭蛋白CrkL抗體Human FAM71F2 ELISA Kit兔子前列腺素E2(PGE2)免疫試劑盒

桔綠木霉色素P450 24A1抗體Human FAM71E2 ELISA Kit兔子前列腺素E1(PGE1)免疫試劑盒

線蟲被毛孢色素P450 2R1抗體Human FAM185A ELISA Kit兔子前列腺素A2 免疫試劑盒

枯草芽孢桿菌銅代謝結(jié)構(gòu)域蛋白10抗體Human FAM175A ELISA Kit兔子前列腺素A1 免疫試劑盒

紫紅曲霉鈣周期素結(jié)合蛋白抗體Human FAM71E2 ELISA Kit兔子前白蛋白(PA)免疫試劑盒

釀酒酵母7號(hào)染色體開放閱讀框69抗體Human FAM72A ELISA Kit兔子葡萄糖依賴性胰島素釋放多肽(GIP)免疫試劑盒

塔賓曲霉銅代謝結(jié)構(gòu)域蛋白3抗體Human FAM185A ELISA Kit兔子皮質(zhì)酮(CORT)免疫試劑盒

釀酒酵母19號(hào)染色體開放閱讀框71抗體Human FAM186B ELISA Kit兔子皮質(zhì)(Cortisol)免疫試劑盒

pAAV-RC2異染色體同源蛋白1抗體Human FAM71F2 ELISA Kit兔子Ⅱ(FⅡ)免疫試劑盒

蕈狀芽孢桿菌銅代謝結(jié)構(gòu)域蛋白8抗體Human FAM124B ELISA Kit兔子黏多糖/糖聚糖免疫試劑盒

光黑腹菌抗體Human FAM127A ELISA Kit兔子腦鈉素(BNP)免疫試劑盒

蜂房哈夫尼菌4號(hào)染色體開放閱讀款Human FAM127B ELISA Kit兔子內(nèi)皮抑素(ES)免疫試劑盒

草木樨中華根瘤菌凋亡加強(qiáng)結(jié)構(gòu)域蛋白11抗體Human FAM129A ELISA Kit兔子內(nèi)皮素1(ET-1)免疫試劑盒
鯊魚源性成分（Shark）PCR檢測(cè)試劑盒桑黃Phellinus│linteus (Berk. & M.A. Curtis) Teng 質(zhì)量規(guī)格：>98.5%,BR,可用于培養(yǎng)磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶試劑盒N-甲基野靛堿;Caulophyllin

鮑曼不動(dòng)桿菌Acinetobacter│baumanii 質(zhì)量規(guī)格：>99%,BR磷酸化外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶試劑盒肌; Inositol

溜曲霉Aspergillus│tamarii 質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品磷酸化糖原合成酶激酶3試劑盒加蘭他敏;Galanthamine

產(chǎn)黃青霉Penicillium│chrysogenum 質(zhì)量規(guī)格：>99%,BR磷酸化肌球蛋白輕鏈試劑盒甲基;Methyl hesperi

釀酒酵母Saccharomyces│cerevisiae 質(zhì)量規(guī)格：>99%,標(biāo)準(zhǔn)品磷酸化蛋白激酶C試劑盒京尼平;Genipin

釀酒酵母Saccharomyces│cerevisiae 質(zhì)量規(guī)格：>95%,BR磷酸化蛋白激酶B試劑盒伐侖克林;Varenicline

大腸埃希氏菌Escherichia│coli 質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR淋巴趨化因子試劑盒甲基黃連堿;Worenine chlor

蒼白彎孢Curvularia│pallescens 質(zhì)量規(guī)格：>98%,反式,BR淋巴抗原6復(fù)合物基因座A試劑盒吉馬酮;Germacrone

大島芽孢桿菌Bacillus│oshimensis 質(zhì)量規(guī)格：>99%,BR淋巴功能相關(guān)抗原3試劑盒劍麻皂苷元;Tigogenin
使用方法：
一、樣品DNA的制備
用自選方法提取細(xì)菌樣品DNA。注意：DNA純化方法是決定檢測(cè)靈敏度的關(guān)鍵因素。如果不能很好純化樣品DNA，后面的PCR再靈敏也不能提高整體檢測(cè)靈敏度。
二、制備O157:H7標(biāo)準(zhǔn)曲線（以10-10E6這6個(gè)10倍稀釋度為例。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行，千萬(wàn)不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體病毒做陽(yáng)性對(duì)照，只提供沒有傳染性的、可以直接使用的DNA片段作為陽(yáng)性對(duì)照。
1. 標(biāo)記6個(gè)離心管，分別為6，5，4，3，2和1號(hào)。
2. 用帶芯槍頭分別加入45 μL超純水（用帶芯槍頭，下同）。
3. 先將本試劑盒提供的陽(yáng)性對(duì)照用TE緩沖液或超純水10倍梯度稀釋到10E7拷貝/μL（注：請(qǐng)不要將本試劑盒提供的標(biāo)準(zhǔn)品一次性稀釋至10E7拷貝/μL，建議每次稀釋10倍，梯度稀釋至10E7拷貝/μL）。
4. 在6號(hào)管中加入5 μL 10E7拷貝/μL的O157:H7陽(yáng)性對(duì)照(上步稀釋所得)，充分震蕩1分鐘，得10E6拷貝/μL的陽(yáng)性對(duì)照。
5. 換槍頭，從6號(hào)管中取5 μL溶液到5號(hào)管中，充分震蕩1分鐘，得10E5拷貝/μL的陽(yáng)性對(duì)照。
6. 換槍頭，從5號(hào)管中取5 μL溶液到4號(hào)管中，重復(fù)上面的操作直到得到6個(gè)稀釋度的陽(yáng)性對(duì)照。
7. NC管中不加任何陽(yáng)性對(duì)照。
8. 從1-6號(hào)管中分別取5 μL和待測(cè)樣品一起進(jìn)行定量PCR（見下步），每個(gè)樣品做3次重復(fù)。PCR后得到每個(gè)陽(yáng)性對(duì)照稀釋樣品的熒光PCR Ct值，并以之為縱軸，以濃度的對(duì)數(shù)值為橫軸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。