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上海莼試生物技術(shù)有限公司
主營產(chǎn)品： ELISA試劑盒,ELISA試劑盒價格，ELISA試劑盒報價 |
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- 聯(lián)系人：
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- 上海市嘉定區(qū)嘉羅公路1661號
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| 參考價 | 面議 |
- 型號 50T
- 品牌 其他品牌
- 廠商性質(zhì) 經(jīng)銷商
- 所在地 上海市
更新時間：2021-07-12 14:40:34瀏覽次數(shù)：152
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參數(shù)規(guī)格：
產(chǎn)品名稱：新布尼亞病毒PCR檢測試劑盒
產(chǎn)品貨號：CP99470
產(chǎn)品規(guī)格：50T
產(chǎn)品分類：熒光PCR法
產(chǎn)品運輸：低溫運輸
產(chǎn)品保存：-20℃保存
產(chǎn)品有效期：一年
產(chǎn)品特點：本產(chǎn)品就是根據(jù)保守區(qū)設計引物而開發(fā)的高靈敏熒光定量 PCR 產(chǎn)品。
PCR反應鑒定——PCR反應條件:
循環(huán)步驟 | 溫度 | 時間 | 循環(huán)數(shù) |
預變性 | 94℃ | 5 min | 1 |
變性 | 94℃ | 10 sec | 30-40 |
退火 | 50-65℃ | 20 sec | 30-40 |
延伸 | 72℃ | 30 sec/kb | 30-40 |
終延伸 | 72℃ | 5 min | 1 |
實驗過程：
一、試劑準備
1. DNA模板
2．對應目的基因的特異引物（在PCR反應中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設計。因此，擴增不同的基因需要設計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1（10pM） 2μl
引物2（10PM） 2μl
Taq酶（2U/μl） 1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl） 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
實驗注意事項：
1）RT-PCR可以檢測組織、細胞、血液、細菌等很多材料，不同的樣本有不同要求，實驗前請充分溝通確認實驗方案和樣本情況；
2）客戶盡可能提供實驗的背景信息、物種、基因準確的名稱和ID號；
3）客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。
4）樣本保存于液氮或干冰，也可以保存于Trizol液中。
使用方法：
一、樣品DNA的制備
用自選方法提取細菌樣品DNA。注意：DNA純化方法是決定檢測靈敏度的關鍵因素。如果不能很好純化樣品DNA，后面的PCR再靈敏也不能提高整體檢測靈敏度。
二、制備O157:H7標準曲線（以10-10E6這6個10倍稀釋度為例。由于標準品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體病毒做陽性對照，只提供沒有傳染性的、可以直接使用的DNA片段作為陽性對照。
1. 標記6個離心管，分別為6，5，4，3，2和1號。
2. 用帶芯槍頭分別加入45 μL超純水（用帶芯槍頭，下同）。
3. 先將本試劑盒提供的陽性對照用TE緩沖液或超純水10倍梯度稀釋到10E7拷貝/μL（注：請不要將本試劑盒提供的標準品一次性稀釋至10E7拷貝/μL，建議每次稀釋10倍，梯度稀釋至10E7拷貝/μL）。
4. 在6號管中加入5 μL 10E7拷貝/μL的O157:H7陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩1分鐘，得10E6拷貝/μL的陽性對照。
5. 換槍頭，從6號管中取5 μL溶液到5號管中，充分震蕩1分鐘，得10E5拷貝/μL的陽性對照。
6. 換槍頭，從5號管中取5 μL溶液到4號管中，重復上面的操作直到得到6個稀釋度的陽性對照。
7. NC管中不加任何陽性對照。
8. 從1-6號管中分別取5 μL和待測樣品一起進行定量PCR（見下步），每個樣品做3次重復。PCR后得到每個陽性對照稀釋樣品的熒光PCR Ct值，并以之為縱軸，以濃度的對數(shù)值為橫軸，繪制標準曲線。
實時熒光定量PCR（quantitative real-time PCR，qPCR）是指在PCR反應體系中加入熒光基團，利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進程，最后通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。實時熒光定量PCR的化學原理包括探針類和非探針類兩類，探針類是利用與靶細胞序列特異性雜交的探針來指示擴增產(chǎn)物的增加，非探針類是利用熒光染料或者特異性設計的引物來指示擴增的增加。運用該技術(shù)可以對DNA、RNA樣品進行定量（包括定量和相對定量）和定性分析。
主要服務：DNA或RNA的定量分析、基因表達差異分析、基因分型。
主要技術(shù)：引物設計、RNA提取、cDNA合成、qPCR。
花錨（標準品）英文名稱： Boron solutionG蛋白偶聯(lián)受體RTA蛋白抗體規(guī)格：5g
花旗松素,二氫槲皮素(標準品)英文名稱： Bismuth solutionG蛋白偶聯(lián)受體GPR155蛋白抗體規(guī)格：1g
花生紅衣（標準品）英文名稱： Copper solutionG蛋白偶聯(lián)受體GPR30蛋白抗體規(guī)格：5g
華北大黃（標準品）英文名稱： Copper solutionG蛋白偶聯(lián)受體GPR86蛋白抗體規(guī)格：500mg
華佩蘭（標準品）英文名稱： Chromium solutionG蛋白偶聯(lián)受體HM74蛋白抗體規(guī)格：25g
化橘紅(柚)（標準品）英文名稱： Chromium solution樣蛋白1樣蛋白抗體規(guī)格：5g
（標準品）英文名稱： Chromium solution磷酸化接頭蛋白Gab 2抗體規(guī)格：25g
槐耳菌質(zhì)（標準品）英文名稱： Cobalt standard磷酸化接頭蛋白Gab2抗體規(guī)格：5g
槐果堿（標準品）英文名稱： Cobalt standard干擾素/維酸誘導凋亡相關基因抗體規(guī)格：1g
槐花（標準品）英文名稱： Dysprosium standard磷酸化接頭蛋白Gab 2抗體規(guī)格：250mg
槐黃英文名稱： Europium standard多肽N-乙酰氨基半乳糖轉(zhuǎn)移酶13抗體規(guī)格：100g
槐角（標準品）英文名稱： Fluoride standard銜接蛋白γ/γ1-Adaptin抗體規(guī)格：25g
槐角苷;槐屬苷(標準品)英文名稱： Fluoride standard半乳糖瓦爾登轉(zhuǎn)化酶抗體規(guī)格：5g
槐米（標準品）英文名稱： Gold standard半乳糖凝集素10抗體規(guī)格：25g
獾油（標準品）英文名稱： Germanium standard半乳糖激酶2抗體規(guī)格：5g
新布尼亞病毒PCR檢測試劑盒固黑K鹽FastK
固紅3Fast
固紅BFastB
固紅KL鹽Red
固紅RLFastRL
固紅-萘磺酸TRRed
固紅紫色LB鹽FastViolet
固藍BFastB
固綠FCFFastFCF
固深紅GBCGarnet
瓜子金皂苷XXXI(對照品)Polygalasaponin79103-90-5
瓜子金皂苷己（標準品）Polygalasaponin882664-74-6
呱西替柳（標準品）Guacetisal質(zhì)量規(guī)格：含量測定
寡霉素AOligomycin579-13-5
寡霉素BOligomycinfrom
