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實(shí)時(shí)熒光定量PCR（quantitative real-time PCR，qPCR）是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程，最后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法。實(shí)時(shí)熒光定量PCR的化學(xué)原理包括探針類和非探針類兩類，探針類是利用與靶細(xì)胞序列特異性雜交的探針來指示擴(kuò)增產(chǎn)物的增加，非探針類是利用熒光染料或者特異性設(shè)計(jì)的引物來指示擴(kuò)增的增加。運(yùn)用該技術(shù)可以對(duì)DNA、RNA樣品進(jìn)行定量（包括定量和相對(duì)定量）和定性分析。
主要服務(wù)：DNA或RNA的定量分析、基因表達(dá)差異分析、基因分型。
主要技術(shù)：引物設(shè)計(jì)、RNA提取、cDNA合成、qPCR。
參數(shù)規(guī)格：
產(chǎn)品名稱：乙型流感病毒PCR檢測(cè)試劑盒
產(chǎn)品貨號(hào)：CP99128
產(chǎn)品規(guī)格：50T
產(chǎn)品分類：熒光PCR法
產(chǎn)品運(yùn)輸：低溫運(yùn)輸
產(chǎn)品保存：-20℃保存
產(chǎn)品有效期：一年
產(chǎn)品特點(diǎn)：本產(chǎn)品就是根據(jù)保守區(qū)設(shè)計(jì)引物而開發(fā)的高靈敏熒光定量 PCR 產(chǎn)品。
PCR反應(yīng)鑒定——PCR反應(yīng)條件:

實(shí)驗(yàn)過程：
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2．對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此，擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
?
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
      10×PCR buffer             5μl
      dNTP mixl                 4μl
      引物1（10pM）               2μl
      引物2（10PM）              2μl
      Taq酶（2U/μl）            1μl
      DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
     加ddH2O至               50 μl
     視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃保存。
4．PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測(cè)。
實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)：
1）RT-PCR可以檢測(cè)組織、細(xì)胞、血液、細(xì)菌等很多材料，不同的樣本有不同要求，實(shí)驗(yàn)前請(qǐng)充分溝通確認(rèn)實(shí)驗(yàn)方案和樣本情況；
2）客戶盡可能提供實(shí)驗(yàn)的背景信息、物種、基因準(zhǔn)確的名稱和ID號(hào)；
3）客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。
4）樣本保存于液氮或干冰，也可以保存于Trizol液中。
使用方法：
一、樣品DNA的制備
用自選方法提取細(xì)菌樣品DNA。注意：DNA純化方法是決定檢測(cè)靈敏度的關(guān)鍵因素。如果不能很好純化樣品DNA，后面的PCR再靈敏也不能提高整體檢測(cè)靈敏度。
二、制備O157:H7標(biāo)準(zhǔn)曲線（以10-10E6這6個(gè)10倍稀釋度為例。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體病毒做陽性對(duì)照，只提供沒有傳染性的、可以直接使用的DNA片段作為陽性對(duì)照。
1. 標(biāo)記6個(gè)離心管，分別為6，5，4，3，2和1號(hào)。
2. 用帶芯槍頭分別加入45 μL超純水（用帶芯槍頭，下同）。
3. 先將本試劑盒提供的陽性對(duì)照用TE緩沖液或超純水10倍梯度稀釋到10E7拷貝/μL（注：請(qǐng)不要將本試劑盒提供的標(biāo)準(zhǔn)品一次性稀釋至10E7拷貝/μL，建議每次稀釋10倍，梯度稀釋至10E7拷貝/μL）。
4. 在6號(hào)管中加入5 μL 10E7拷貝/μL的O157:H7陽性對(duì)照(上步稀釋所得)，充分震蕩1分鐘，得10E6拷貝/μL的陽性對(duì)照。
5. 換槍頭，從6號(hào)管中取5 μL溶液到5號(hào)管中，充分震蕩1分鐘，得10E5拷貝/μL的陽性對(duì)照。
6. 換槍頭，從5號(hào)管中取5 μL溶液到4號(hào)管中，重復(fù)上面的操作直到得到6個(gè)稀釋度的陽性對(duì)照。
7. NC管中不加任何陽性對(duì)照。
8. 從1-6號(hào)管中分別取5 μL和待測(cè)樣品一起進(jìn)行定量PCR（見下步），每個(gè)樣品做3次重復(fù)。PCR后得到每個(gè)陽性對(duì)照稀釋樣品的熒光PCR Ct值，并以之為縱軸，以濃度的對(duì)數(shù)值為橫軸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
蘋果酸脫氫酶(MDH)elisa試劑盒英文名稱：MDH ELISA Kit通道蛋白-2抗體規(guī)格：25g

嘌呤核苷酸磷酸化酶(PNP)elisa試劑盒英文名稱：PNP ELISA Kit血管緊張素原抗體規(guī)格：10MG

皮質(zhì)酮/腎上腺酮(CORT)elisa試劑盒英文名稱：CORT ELISA Kit雄激素受體抗體規(guī)格：10MG

(Cortisol)elisa試劑盒英文名稱：Cortisol ELISA Kit死亡調(diào)節(jié)蛋白抗體(凋亡、半胱酸蛋白酶激活抑制劑)規(guī)格：25g

胚胎干細(xì)胞系MESPU30(M30)elisa試劑盒英文名稱：M30 ELISA Kit軸蛋白1抗體規(guī)格：5g

膀胱腫瘤抗原(BTA)elisa試劑盒英文名稱：BTA ELISA Kit自噬相關(guān)蛋白9B抗體規(guī)格：25ml

牛小腸堿性磷酸酶(CIAP)elisa試劑盒英文名稱：CIAP ELISA Kit自噬相關(guān)蛋白12抗體規(guī)格：5ml

XIII B(F13B)elisa試劑盒英文名稱：F13B ELISA Kit自噬相關(guān)蛋白13抗體規(guī)格：25g

XIII A1(F13A1)elisa試劑盒英文名稱：F13A1 ELISA Kit自噬相關(guān)蛋白3抗體規(guī)格：5g

VIIIa輕鏈(F8aLC)elisa試劑盒英文名稱：F8aLC ELISA Kit整合素樣金屬蛋白酶與4型抗體規(guī)格：100mg

Ⅻ(FⅫ)elisa試劑盒英文名稱：FⅫ ELISA Kit磷酸化活化復(fù)制因子2抗體規(guī)格：25g

Ⅺ(FⅪ)elisa試劑盒英文名稱：FⅪ ELISA Kit磷酸化APP(Tyr757)淀粉樣肽前體蛋白抗體規(guī)格：5g

Ⅹ(FⅩ)elisa試劑盒英文名稱：FⅩ ELISA Kit/蛋白激酶ATR抗體規(guī)格：10g

Ⅸ(FⅨ)elisa試劑盒英文名稱：FⅨ ELISA Kit去整合素樣金屬蛋白酶18抗體規(guī)格：250g

Ⅷ相關(guān)抗原(FⅧ-Ag)elisa試劑盒英文名稱：FⅧ-Ag ELISA Kit活化轉(zhuǎn)錄因子6抗體規(guī)格：50g
乙型流感病毒PCR檢測(cè)試劑盒1號(hào)染色體開放閱讀框38抗體纖維膠凝蛋白1(FCN1)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)中文名稱：(S)-叔丁基4-(6-氨基-1,3-二甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-基)-3-甲基-1-甲酸叔丁酯：1616415-40-7

脫羧酶蛋白體36抗體蛋白激酶Cγ(PKCγ)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)中文名稱：2-芐氧基惡唑 ：951698-15-0 分子式：C15H18N2O2 分子量：258.31562

間隙連接蛋白40抗體抗氧化低密度脂蛋白抗體(OLAb)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)中文名稱：1-芘甲醛：3029-19-4中文別名：1-芘甲醛;芘-1-甲醛;1-Pyrenecarboxaldehyde 1-芘甲醛;1-芘羰醛;芘羧

間隙連接蛋白43抗體凝集素樣氧化低密度脂蛋白受體1(LOX1)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)NA

間隙連接蛋白45抗體凝集素樣氧化低密度脂蛋白受體1(LOX1)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)中文名稱：3-甲氧基-2-呋喃醛：32487-58-4中文別名：3-甲氧基-2-呋喃甲醛;3-甲氧基-2-呋喃醛英文名稱：3-methoxy-2-Fur

表面趨化因子受體1抗體凝集素樣氧化低密度脂蛋白受體1(LOX1)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)中文名稱：3-碘-5-甲酸吲唑：885521-46-0中文別名：3-碘-5-(1H)吲唑羧酸;3-碘-5-甲酸吲唑英文名稱：3-Iodo-1H-inda

色素P450單氧化酶抗體速激肽受體2(TACR2)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)中文名稱：(3aR.6aR)-1-甲基六氫吡咯并[3.4-b]吡咯：1353644-77-5中文別名：2-溴-2-丁烯;(3aR,6aR)-1-甲基六氫

色素C抗體釋放激素(GnRH)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)中文名稱：4-(三氟甲基)環(huán)己醇：30129-18-1中文別名：4-(三氟甲基)環(huán)己醇;4-三氟甲基環(huán)己醇;4-(三氟甲基)環(huán)己醇 (順反混和物);3-