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上海莼試生物技術(shù)有限公司
主營產(chǎn)品： ELISA試劑盒,ELISA試劑盒價格，ELISA試劑盒報價 |
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| 參考價 | 面議 |
- 型號 50T
- 品牌 其他品牌
- 廠商性質(zhì) 經(jīng)銷商
- 所在地 上海市
更新時間：2021-07-16 10:21:47瀏覽次數(shù)：231
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實時熒光定量PCR（quantitative real-time PCR，qPCR）是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團，利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進(jìn)程，最后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知模板進(jìn)行定量分析的方法。實時熒光定量PCR的化學(xué)原理包括探針類和非探針類兩類，探針類是利用與靶細(xì)胞序列特異性雜交的探針來指示擴增產(chǎn)物的增加，非探針類是利用熒光染料或者特異性設(shè)計的引物來指示擴增的增加。運用該技術(shù)可以對DNA、RNA樣品進(jìn)行定量（包括定量和相對定量）和定性分析。
主要服務(wù)：DNA或RNA的定量分析、基因表達(dá)差異分析、基因分型。
主要技術(shù)：引物設(shè)計、RNA提取、cDNA合成、qPCR。
參數(shù)規(guī)格：
產(chǎn)品名稱：轉(zhuǎn)基因植物PAT基因PCR檢測試劑盒
產(chǎn)品貨號：CP100012
產(chǎn)品規(guī)格：50T
產(chǎn)品分類：熒光-PCR法
產(chǎn)品運輸：低溫運輸
產(chǎn)品保存：-20℃保存
產(chǎn)品有效期：一年
產(chǎn)品特點：本產(chǎn)品就是根據(jù)保守區(qū)設(shè)計引物而開發(fā)的高靈敏熒光定量 PCR 產(chǎn)品。
PCR反應(yīng)鑒定——PCR反應(yīng)條件:
循環(huán)步驟 | 溫度 | 時間 | 循環(huán)數(shù) |
預(yù)變性 | 94℃ | 5 min | 1 |
變性 | 94℃ | 10 sec | 30-40 |
退火 | 50-65℃ | 20 sec | 30-40 |
延伸 | 72℃ | 30 sec/kb | 30-40 |
終延伸 | 72℃ | 5 min | 1 |
實驗過程：
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2．對應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計。因此，擴增不同的基因需要設(shè)計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
?
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1（10pM） 2μl
引物2（10PM） 2μl
Taq酶（2U/μl） 1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl） 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
實驗注意事項：
1）RT-PCR可以檢測組織、細(xì)胞、血液、細(xì)菌等很多材料，不同的樣本有不同要求，實驗前請充分溝通確認(rèn)實驗方案和樣本情況；
2）客戶盡可能提供實驗的背景信息、物種、基因準(zhǔn)確的名稱和ID號；
3）客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。
4）樣本保存于液氮或干冰，也可以保存于Trizol液中。
使用方法：
一、樣品DNA的制備
用自選方法提取細(xì)菌樣品DNA。注意：DNA純化方法是決定檢測靈敏度的關(guān)鍵因素。如果不能很好純化樣品DNA，后面的PCR再靈敏也不能提高整體檢測靈敏度。
二、制備O157:H7標(biāo)準(zhǔn)曲線（以10-10E6這6個10倍稀釋度為例。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進(jìn)行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體病毒做陽性對照，只提供沒有傳染性的、可以直接使用的DNA片段作為陽性對照。
1. 標(biāo)記6個離心管，分別為6，5，4，3，2和1號。
2. 用帶芯槍頭分別加入45 μL超純水（用帶芯槍頭，下同）。
3. 先將本試劑盒提供的陽性對照用TE緩沖液或超純水10倍梯度稀釋到10E7拷貝/μL（注：請不要將本試劑盒提供的標(biāo)準(zhǔn)品一次性稀釋至10E7拷貝/μL，建議每次稀釋10倍，梯度稀釋至10E7拷貝/μL）。
4. 在6號管中加入5 μL 10E7拷貝/μL的O157:H7陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩1分鐘，得10E6拷貝/μL的陽性對照。
5. 換槍頭，從6號管中取5 μL溶液到5號管中，充分震蕩1分鐘，得10E5拷貝/μL的陽性對照。
6. 換槍頭，從5號管中取5 μL溶液到4號管中，重復(fù)上面的操作直到得到6個稀釋度的陽性對照。
7. NC管中不加任何陽性對照。
8. 從1-6號管中分別取5 μL和待測樣品一起進(jìn)行定量PCR（見下步），每個樣品做3次重復(fù)。PCR后得到每個陽性對照稀釋樣品的熒光PCR Ct值，并以之為縱軸，以濃度的對數(shù)值為橫軸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
殼菌卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白43抗體Human EIF4A3 ELISA Kit兔血栓素A2(TXA2)免疫試劑盒
熱帶假絲酵母卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白46抗體Human EIF4B ELISA Kit兔血漿α顆粒膜蛋白(GMP-140)免疫試劑盒
枇杷假尾孢褐斑病卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白63抗體Human EIF4E3 ELISA Kit兔血紅素氧合酶1(HMOX1)免疫試劑盒
香菇卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白54抗體Human EIF4E2 ELISA Kit兔血管性血友病因子/瑞斯托霉素輔因子(VWF)免疫試劑盒
毛簇木霉卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白61抗體Human EIF4EBP2 ELISA Kit兔血管生成素2(ANG-2)免疫試劑盒
解淀粉芽孢桿菌植物亞種卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白8抗體Human EIF4G1 ELISA Kit兔血管內(nèi)皮粘附分子1(VCAM-1/CD106)免疫試劑盒
禽腺病神經(jīng)酰激酶CERK抗體Human EIF4G3 ELISA Kit兔血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)免疫試劑盒
假交替單胞菌分裂周期樣激酶2抗體Human EIF3E ELISA Kit兔血管緊張素Ⅱ(ANG-Ⅱ)免疫試劑盒
豬瘟病分裂周期樣激酶3抗體Human EIF4H ELISA Kit兔信號肽,CUB域,EGF樣1(SCUBE1)免疫試劑盒
擬青霉17號染色體開放閱讀框49抗體Human EIF3G ELISA Kit兔心肌特異性肌鈣蛋白T(c)免疫試劑盒
蘇云金芽胞桿菌肯尼亞亞種17號染色體開放閱讀框53抗體Human EIF3H ELISA Kit兔心肌肌鈣蛋白Ⅰ(cTn-Ⅰ)免疫試劑盒
四川散斑殼17號染色體開放閱讀框57抗體Human EIF3J ELISA Kit兔纖溶抑制因子(TAFI)免疫試劑盒
柱狀田頭菇17號染色體開放閱讀框64抗體Human EIF3I ELISA Kit兔纖溶酶抗纖溶酶復(fù)合物(PAP)免疫試劑盒
耐冷冷桿菌17號染色體開放閱讀框66抗體Human EIF3L ELISA Kit兔色素b-245重鏈(CYBB)免疫試劑盒
栗疫菌17號染色體開放閱讀框74抗體Human EIF3K ELISA Kit兔維甲酸受體應(yīng)答蛋白2(RARRES2)免疫試劑盒
梨葉殼小圓孢菌17號染色體開放閱讀框75抗體Human EIF2C1 ELISA Kit兔糖化血紅蛋白A1c(A1c)免疫試劑盒
轉(zhuǎn)基因植物PAT基因PCR檢測試劑盒假單胞菌Pseudomonas│sp. 質(zhì)量規(guī)格：粘度≥0.005 pa.s顆粒酶H試劑盒;Baicalin
頂孢霉屬Acremonium│sp. 質(zhì)量規(guī)格：≥98%,BR顆粒酶B試劑盒;Palmatine chlori
大腸埃希菌Escherichia│coli 質(zhì)量規(guī)格：>99%,BR顆粒酶A試劑盒灰氈毛忍冬皂苷乙;Macranthoid
舟形毛殼Chaetomium│cymbiforme 質(zhì)量規(guī)格：HPLC>99%,標(biāo)準(zhǔn)品柯薩奇病腺病受體試劑盒黃芪甲苷;Astragaloside I
需鹽色鹽桿菌Chromohalobacter│salexigens 質(zhì)量規(guī)格：>99%,醫(yī)藥級柯薩奇病IgE試劑盒虎杖苷;Polydatin
大腸埃希氏菌Escherichia│coli 質(zhì)量規(guī)格：>99.0%,BR柯薩奇病IgA試劑盒槲皮苷;Quercitrin
阿拉伯海假交替單胞菌Pseudoalteromonas│arabiensis 質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品柯薩奇病A16試劑盒蒿甲;Artemether
耐酸乳桿菌Lactobacillus│acetotolerans 質(zhì)量規(guī)格：>98.5%,USP31柯薩奇病A16試劑盒槲皮素;Quercetin
磚紅鐮孢Fusarium│lateritium 質(zhì)量規(guī)格：粘度(1%,25℃) ≥500 mpa.s柯薩奇病A16試劑盒胡黃連苷Ⅱ;Picroside Ⅱ
