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上海莼試生物技術有限公司
主營產(chǎn)品： ELISA試劑盒,ELISA試劑盒價格，ELISA試劑盒報價 |
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| 參考價 | 面議 |
- 型號 50T
- 品牌 其他品牌
- 廠商性質 經(jīng)銷商
- 所在地 上海市
更新時間：2021-07-12 15:52:53瀏覽次數(shù)：181
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實時熒光定量PCR（quantitative real-time PCR，qPCR）是指在PCR反應體系中加入熒光基團，利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進程，最后通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。實時熒光定量PCR的化學原理包括探針類和非探針類兩類，探針類是利用與靶細胞序列特異性雜交的探針來指示擴增產(chǎn)物的增加，非探針類是利用熒光染料或者特異性設計的引物來指示擴增的增加。運用該技術可以對DNA、RNA樣品進行定量（包括定量和相對定量）和定性分析。
主要服務：DNA或RNA的定量分析、基因表達差異分析、基因分型。
主要技術：引物設計、RNA提取、cDNA合成、qPCR。
參數(shù)規(guī)格：
產(chǎn)品名稱：禽腦脊髓炎病毒（AEV）PCR檢測試劑盒
產(chǎn)品貨號：CP99735
產(chǎn)品規(guī)格：50T
產(chǎn)品分類：熒光-PCR法
產(chǎn)品運輸：低溫運輸
產(chǎn)品保存：-20℃保存
產(chǎn)品有效期：一年
產(chǎn)品特點：本產(chǎn)品就是根據(jù)保守區(qū)設計引物而開發(fā)的高靈敏熒光定量 PCR 產(chǎn)品。
PCR反應鑒定——PCR反應條件:
循環(huán)步驟 | 溫度 | 時間 | 循環(huán)數(shù) |
預變性 | 94℃ | 5 min | 1 |
變性 | 94℃ | 10 sec | 30-40 |
退火 | 50-65℃ | 20 sec | 30-40 |
延伸 | 72℃ | 30 sec/kb | 30-40 |
終延伸 | 72℃ | 5 min | 1 |
實驗過程：
一、試劑準備
1. DNA模板
2．對應目的基因的特異引物（在PCR反應中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設計。因此，擴增不同的基因需要設計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
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二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1（10pM） 2μl
引物2（10PM） 2μl
Taq酶（2U/μl） 1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl） 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結束反應，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
實驗注意事項：
1）RT-PCR可以檢測組織、細胞、血液、細菌等很多材料，不同的樣本有不同要求，實驗前請充分溝通確認實驗方案和樣本情況；
2）客戶盡可能提供實驗的背景信息、物種、基因準確的名稱和ID號；
3）客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。
4）樣本保存于液氮或干冰，也可以保存于Trizol液中。
使用方法：
一、樣品DNA的制備
用自選方法提取細菌樣品DNA。注意：DNA純化方法是決定檢測靈敏度的關鍵因素。如果不能很好純化樣品DNA，后面的PCR再靈敏也不能提高整體檢測靈敏度。
二、制備O157:H7標準曲線（以10-10E6這6個10倍稀釋度為例。由于標準品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體病毒做陽性對照，只提供沒有傳染性的、可以直接使用的DNA片段作為陽性對照。
1. 標記6個離心管，分別為6，5，4，3，2和1號。
2. 用帶芯槍頭分別加入45 μL超純水（用帶芯槍頭，下同）。
3. 先將本試劑盒提供的陽性對照用TE緩沖液或超純水10倍梯度稀釋到10E7拷貝/μL（注：請不要將本試劑盒提供的標準品一次性稀釋至10E7拷貝/μL，建議每次稀釋10倍，梯度稀釋至10E7拷貝/μL）。
4. 在6號管中加入5 μL 10E7拷貝/μL的O157:H7陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩1分鐘，得10E6拷貝/μL的陽性對照。
5. 換槍頭，從6號管中取5 μL溶液到5號管中，充分震蕩1分鐘，得10E5拷貝/μL的陽性對照。
6. 換槍頭，從5號管中取5 μL溶液到4號管中，重復上面的操作直到得到6個稀釋度的陽性對照。
7. NC管中不加任何陽性對照。
8. 從1-6號管中分別取5 μL和待測樣品一起進行定量PCR（見下步），每個樣品做3次重復。PCR后得到每個陽性對照稀釋樣品的熒光PCR Ct值，并以之為縱軸，以濃度的對數(shù)值為橫軸，繪制標準曲線。
阿曲汀/酸英文名稱： 5-Isopropyl-2-methylphenol同源盒蛋白HOXB13抗體規(guī)格：5g
阿瑞吡坦;阿瑞匹坦英文名稱： METHYL HEPTADECANOATE磷酸化3磷酸肌依賴性蛋白激酶1抗體規(guī)格：1g
英文名稱： 2α,5α-Epoxy-1,2-dihydroakuammilan-17-oic acid methyl ester磷酸化P63腫瘤抑制基因抗體規(guī)格：25g
阿托伐醌,阿托喹酮英文名稱： 6-HYDROXY-7-METHOXYCOUMARIN磷酸化p21激活激酶4抗體規(guī)格：5g
阿西美辛英文名稱： PIEFELTARRAENIN A磷酸化P73腫瘤抑制基因抗體規(guī)格：100g
埃索美拉唑鎂(三)英文名稱： Tomatidine磷酸化DNA修復蛋白NBS1抗體規(guī)格：25g
艾地苯醌英文名稱： (-)-CAMPHORp53正向凋亡調控因子抗體規(guī)格：5g
艾普拉唑/奧普拉唑英文名稱： 3-ACETYL-11-KETO-BETA-BOSWELLIC ACID磷脂酶C1樣蛋白抗體規(guī)格：25g
英文名稱： 3',4',5',5,7-PENTAMETHOXYFLAVONE前列腺癌和結腸癌相關蛋白規(guī)格：1g
英文名稱： OrangeΙΙ重組蛋白G抗體規(guī)格：250mg
氨芬酸鈉英文名稱： AURAMINE O 磷脂酰肌激酶催化亞單位A抗體規(guī)格：1g
英文名稱： Carmine蛋白質二硫鍵異構酶抗體規(guī)格：250mg
氨己烯酸英文名稱： Acid Red 51足特異蛋白抗體規(guī)格：25g
氨環(huán)酸英文名稱： Acid Red 73腫瘤抑制基因抗體（野生型P53）規(guī)格：100g
奧苯達唑英文名稱： Lauric acid配對盒基因7抗體規(guī)格：25g
禽腦脊髓炎病毒（AEV）PCR檢測試劑盒人海馬星形膠質(HA-h)(1×106) 人腦血管平滑肌 Human
CM-H052人胎盤絨毛膜*培養(yǎng)基100mL
IL9R Others Rat 大鼠 IL9R / Ierleukin 9 receptor 人裂解液 (陽性對照)
A-431人表皮癌 Human epidermoid carcinoma A-431 cells DMEM+10%FBS
IL5 Protein Human 重組人 IL5 / Ierleukin 5 蛋白
小鼠脈絡膜血管*培養(yǎng)基 100mL
EPOR 紅生成素受體抗體規(guī)格： 0.1ml
EphB6 蛋白激酶受體B6抗體規(guī)格： 0.2ml
ER-alpha 雌激素受體α抗體規(guī)格： 0.1ml
ERAB 內質網(wǎng)Aβ相關結合蛋白抗體規(guī)格： 0.2ml
ERCC1 DNA切除修復蛋白1抗體規(guī)格： 0.2ml
