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實(shí)時(shí)熒光定量PCR（quantitative real-time PCR，qPCR）是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程，最后通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法。實(shí)時(shí)熒光定量PCR的化學(xué)原理包括探針類(lèi)和非探針類(lèi)兩類(lèi)，探針類(lèi)是利用與靶細(xì)胞序列特異性雜交的探針來(lái)指示擴(kuò)增產(chǎn)物的增加，非探針類(lèi)是利用熒光染料或者特異性設(shè)計(jì)的引物來(lái)指示擴(kuò)增的增加。運(yùn)用該技術(shù)可以對(duì)DNA、RNA樣品進(jìn)行定量（包括定量和相對(duì)定量）和定性分析。
主要服務(wù)：DNA或RNA的定量分析、基因表達(dá)差異分析、基因分型。
主要技術(shù)：引物設(shè)計(jì)、RNA提取、cDNA合成、qPCR。
參數(shù)規(guī)格：
產(chǎn)品名稱(chēng)：轉(zhuǎn)基因玉米品系DBT418PCR檢測(cè)試劑盒
產(chǎn)品貨號(hào)：CP100257
產(chǎn)品規(guī)格：48T  0.1PCR管/48T   0.2PCR管
產(chǎn)品分類(lèi)：PCR-熒光探針?lè)?/span>
產(chǎn)品運(yùn)輸：低溫運(yùn)輸
產(chǎn)品保存：-20℃保存
產(chǎn)品有效期：一年
產(chǎn)品特點(diǎn)：本產(chǎn)品就是根據(jù)保守區(qū)設(shè)計(jì)引物而開(kāi)發(fā)的高靈敏熒光定量 PCR 產(chǎn)品。
PCR反應(yīng)鑒定——PCR反應(yīng)條件:

實(shí)驗(yàn)過(guò)程：
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2．對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無(wú)到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此，擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
?
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。
      10×PCR buffer             5μl
      dNTP mixl                 4μl
      引物1（10pM）               2μl
      引物2（10PM）              2μl
      Taq酶（2U/μl）            1μl
      DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
     加ddH2O至               50 μl
     視PCR儀有無(wú)熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃保存。
4．PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測(cè)。
實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)：
1）RT-PCR可以檢測(cè)組織、細(xì)胞、血液、細(xì)菌等很多材料，不同的樣本有不同要求，實(shí)驗(yàn)前請(qǐng)充分溝通確認(rèn)實(shí)驗(yàn)方案和樣本情況；
2）客戶(hù)盡可能提供實(shí)驗(yàn)的背景信息、物種、基因準(zhǔn)確的名稱(chēng)和ID號(hào)；
3）客戶(hù)盡量不要提供DNA或RNA樣品。
4）樣本保存于液氮或干冰，也可以保存于Trizol液中。
使用方法：
一、樣品DNA的制備
用自選方法提取細(xì)菌樣品DNA。注意：DNA純化方法是決定檢測(cè)靈敏度的關(guān)鍵因素。如果不能很好純化樣品DNA，后面的PCR再靈敏也不能提高整體檢測(cè)靈敏度。
二、制備O157:H7標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)（以10-10E6這6個(gè)10倍稀釋度為例。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行，千萬(wàn)不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體病毒做陽(yáng)性對(duì)照，只提供沒(méi)有傳染性的、可以直接使用的DNA片段作為陽(yáng)性對(duì)照。
1. 標(biāo)記6個(gè)離心管，分別為6，5，4，3，2和1號(hào)。
2. 用帶芯槍頭分別加入45 μL超純水（用帶芯槍頭，下同）。
3. 先將本試劑盒提供的陽(yáng)性對(duì)照用TE緩沖液或超純水10倍梯度稀釋到10E7拷貝/μL（注：請(qǐng)不要將本試劑盒提供的標(biāo)準(zhǔn)品一次性稀釋至10E7拷貝/μL，建議每次稀釋10倍，梯度稀釋至10E7拷貝/μL）。
4. 在6號(hào)管中加入5 μL 10E7拷貝/μL的O157:H7陽(yáng)性對(duì)照(上步稀釋所得)，充分震蕩1分鐘，得10E6拷貝/μL的陽(yáng)性對(duì)照。
5. 換槍頭，從6號(hào)管中取5 μL溶液到5號(hào)管中，充分震蕩1分鐘，得10E5拷貝/μL的陽(yáng)性對(duì)照。
6. 換槍頭，從5號(hào)管中取5 μL溶液到4號(hào)管中，重復(fù)上面的操作直到得到6個(gè)稀釋度的陽(yáng)性對(duì)照。
7. NC管中不加任何陽(yáng)性對(duì)照。
8. 從1-6號(hào)管中分別取5 μL和待測(cè)樣品一起進(jìn)行定量PCR（見(jiàn)下步），每個(gè)樣品做3次重復(fù)。PCR后得到每個(gè)陽(yáng)性對(duì)照稀釋樣品的熒光PCR Ct值，并以之為縱軸，以濃度的對(duì)數(shù)值為橫軸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。
阿舒假囊酵母染色體區(qū)域穩(wěn)定蛋白/核輸出蛋白1抗體Human HBXIP(Hepatitis B virus X-interacting protein) ELISA Kit人A組鏈球菌多糖抗原(ASP Ag)免疫試劑盒

釀酒酵母磷酸化轉(zhuǎn)錄因子ELK1抗體Human  MST1R(Macrophage-stimulating protein receptor) ELISA Kit人A激酶PRKA錨定蛋白12(Akap12)免疫試劑盒

豬鏈球菌ETS相關(guān)蛋白71抗體Human LOR (Loricrin) ELISA KIT人AT豐富結(jié)合域1A(ARID1A)免疫試劑盒

枯草芽胞桿菌外胚層發(fā)育不良蛋白1抗體Human LRTM1 (Leucine-rich repeat and transmembrane domain-containing protein 1) ELISA KIT人Apelin 免疫試劑盒

節(jié)狀鐮孢ETV3L蛋白抗體Human LDLRAP1 (Low density lipoprotein receptor adapter protein 1) ELISA KIT人Apelin 36(AP36)免疫試劑盒

直絲淡紫灰鏈霉菌蛋白激酶受體B6抗體Human LRRN4CL (LRRN4 C-terminal-like protein) ELISA KIT人apelin 13(AP13)免疫試劑盒

慢生根瘤菌溶血磷脂酸受體蛋白1抗體Human LECT1 (Leukocyte cell-derived chemotaxin 1) ELISA KIT人apelin 12(AP12)免疫試劑盒

樟疫霉溶血磷脂酸受體蛋白2抗體Human LZTR1 (Leucine-zipper-like transcriptional regulator 1) ELISA KIT人AP-5復(fù)合物β亞基(PP1030)免疫試劑盒

產(chǎn)氣莢膜梭菌 素D型溶血磷脂酸受體蛋白3抗體Human LCP2 (Lymphocyte cytosolic protein 2) ELISA KIT人alpha突觸核蛋白（淀粉樣前體非A4成分蛋白）低聚物(SNCA oligomer)免疫試劑盒

產(chǎn)氣弧菌內(nèi)皮的分化蛋白6抗體Human LYL1 (Protein lyl-1) ELISA KIT人Alpha-D 酚/(Alpha-D TPL)免疫試劑盒

醋化醋桿菌外生性骨疣樣蛋白2抗體Human POMC(Pro-opiomelanocortin) ELISA Kit人alpha-1腎上腺素能受體(ADRA1)IgG抗體免疫試劑盒

釀酒酵母磷酸化eIF4E結(jié)合蛋白抗體Human SEMG2(Semenogelin-2) ELISA Kit人AFG3樣蛋白2(AFG3L2)免疫試劑盒

魯氏接合酵母磷酸化eIF4E結(jié)合蛋白抗體Human LMCD1 (LIM and cysteine-rich domains protein 1) ELISA KIT人Adropin(ENHO)免疫試劑盒

冷溫木拉克酵母內(nèi)皮特異性分子1抗體Human LYRM1 (LYR motif-containing protein 1) ELISA KIT人ADP-核糖基化因子5(ARF5)免疫試劑盒

枯草芽孢桿菌真核翻譯起始因子3F抗體Human LMO1 (Rhombotin-1) ELISA KIT人ADP-核糖基化因子4(ARF4)免疫試劑盒

蠟狀芽孢桿菌真核翻譯起始因子3H抗體Human KDM1A(Lysine-specific histone demethylase 1A) ELISA Kit人ADAM金屬肽酶含血小板反應(yīng)蛋白1基元4(ADAMTS4)免疫試劑盒
轉(zhuǎn)基因玉米品系DBT418PCR檢測(cè)試劑盒短鏈孢霉屬Selenotila│sp. 質(zhì)量規(guī)格：鈉型榿木酮

根霉Rhizopus│sp. 質(zhì)量規(guī)格：for GC,≥99.5%(GC)款冬酮

Methanobrevibacter smithiiMethanobrevibacter smithii 質(zhì)量規(guī)格：Standard for GC,≥99.5%(GC)偽原

巨大芽孢桿菌 ABacillus│megaterium A de Bary 質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品湖貝甲素;YY90410梭砂貝母堿

傳染性法氏囊病病毒Avibirnavirus│Infectious bursal disease virus 質(zhì)量規(guī)格：AR白花前胡乙素

巨大芽孢桿菌Bacillus│megaterium de Bary 質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品,≥99.5%(GC)小豆蔻明

漢遜德巴利酵母Debaryomyces│hansenii 質(zhì)量規(guī)格：1000μg/ml,介質(zhì):1.0 mol/L HNO3喬松素

致病性大腸埃希菌Escherichia│coli 質(zhì)量規(guī)格：100µg/mL,基體:5%HCl

粘性紅圓酵母Rhodotorula│mucilaginosa 質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品美決明子素