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上海莼試生物技術有限公司
主營產品： ELISA試劑盒,ELISA試劑盒價格，ELISA試劑盒報價 |
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- 上海市嘉定區(qū)嘉羅公路1661號
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| 參考價 | 面議 |
- 型號 50T
- 品牌 其他品牌
- 廠商性質 經銷商
- 所在地 上海市
更新時間：2021-07-12 12:11:13瀏覽次數(shù)：183
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參數(shù)規(guī)格：
產品名稱：肺炎鏈球菌PCR檢測試劑盒
產品貨號：CP99211
產品規(guī)格：50T
產品分類：熒光PCR法
產品運輸：低溫運輸
產品保存：-20℃保存
產品有效期：一年
產品特點：本產品就是根據(jù)保守區(qū)設計引物而開發(fā)的高靈敏熒光定量 PCR 產品。
PCR反應鑒定——PCR反應條件:
循環(huán)步驟 | 溫度 | 時間 | 循環(huán)數(shù) |
預變性 | 94℃ | 5 min | 1 |
變性 | 94℃ | 10 sec | 30-40 |
退火 | 50-65℃ | 20 sec | 30-40 |
延伸 | 72℃ | 30 sec/kb | 30-40 |
終延伸 | 72℃ | 5 min | 1 |
實驗過程：
一、試劑準備
1. DNA模板
2．對應目的基因的特異引物（在PCR反應中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設計。因此，擴增不同的基因需要設計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1（10pM） 2μl
引物2（10PM） 2μl
Taq酶（2U/μl） 1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl） 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結束反應，PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
實驗注意事項：
1）RT-PCR可以檢測組織、細胞、血液、細菌等很多材料，不同的樣本有不同要求，實驗前請充分溝通確認實驗方案和樣本情況；
2）客戶盡可能提供實驗的背景信息、物種、基因準確的名稱和ID號；
3）客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。
4）樣本保存于液氮或干冰，也可以保存于Trizol液中。
使用方法：
一、樣品DNA的制備
用自選方法提取細菌樣品DNA。注意：DNA純化方法是決定檢測靈敏度的關鍵因素。如果不能很好純化樣品DNA，后面的PCR再靈敏也不能提高整體檢測靈敏度。
二、制備O157:H7標準曲線（以10-10E6這6個10倍稀釋度為例。由于標準品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產品穩(wěn)定性和避免擴散傳染性病原，本產品不提供活體病毒做陽性對照，只提供沒有傳染性的、可以直接使用的DNA片段作為陽性對照。
1. 標記6個離心管，分別為6，5，4，3，2和1號。
2. 用帶芯槍頭分別加入45 μL超純水（用帶芯槍頭，下同）。
3. 先將本試劑盒提供的陽性對照用TE緩沖液或超純水10倍梯度稀釋到10E7拷貝/μL（注：請不要將本試劑盒提供的標準品一次性稀釋至10E7拷貝/μL，建議每次稀釋10倍，梯度稀釋至10E7拷貝/μL）。
4. 在6號管中加入5 μL 10E7拷貝/μL的O157:H7陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩1分鐘，得10E6拷貝/μL的陽性對照。
5. 換槍頭，從6號管中取5 μL溶液到5號管中，充分震蕩1分鐘，得10E5拷貝/μL的陽性對照。
6. 換槍頭，從5號管中取5 μL溶液到4號管中，重復上面的操作直到得到6個稀釋度的陽性對照。
7. NC管中不加任何陽性對照。
8. 從1-6號管中分別取5 μL和待測樣品一起進行定量PCR（見下步），每個樣品做3次重復。PCR后得到每個陽性對照稀釋樣品的熒光PCR Ct值，并以之為縱軸，以濃度的對數(shù)值為橫軸，繪制標準曲線。
實時熒光定量PCR（quantitative real-time PCR，qPCR）是指在PCR反應體系中加入熒光基團，利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進程，最后通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。實時熒光定量PCR的化學原理包括探針類和非探針類兩類，探針類是利用與靶細胞序列特異性雜交的探針來指示擴增產物的增加，非探針類是利用熒光染料或者特異性設計的引物來指示擴增的增加。運用該技術可以對DNA、RNA樣品進行定量（包括定量和相對定量）和定性分析。
主要服務：DNA或RNA的定量分析、基因表達差異分析、基因分型。
主要技術：引物設計、RNA提取、cDNA合成、qPCR。
心肌肌鈣蛋白T(TNNT2)elisa試劑盒英文名稱：TNNT2 ELISA Kit9號染色體開放閱讀框62抗體規(guī)格：1g
心肌肌鈣蛋白I(TNNI3)elisa試劑盒英文名稱：TNNI3 ELISA Kit9號染色體開放閱讀框64抗體規(guī)格：1g
小核糖核蛋白多肽D1(SNRPD1)elisa試劑盒英文名稱：SNRPD1 ELISA Kit9號染色體開放閱讀框66抗體規(guī)格：5g
硝基(NT)elisa試劑盒英文名稱：NT ELISA Kit9號染色體開放閱讀框68抗體規(guī)格：25g
腺苷酸環(huán)化酶10(ADCY10)elisa試劑盒英文名稱：ADCY10 ELISA Kit9號染色體開放閱讀框7抗體規(guī)格：5g
腺苷A2b受體(ADORA2b)elisa試劑盒英文名稱：ADORA2b ELISA Kit9號染色體開放閱讀框71抗體規(guī)格：1g
線粒體轉錄因子A(TFAM)elisa試劑盒英文名稱：TFAM ELISA KitK-酪蛋白抗體規(guī)格：250mg
線粒體乙醛脫氫酶(ALDM)elisa試劑盒英文名稱：ALDM ELISA Kit20號染色體開放閱讀框26抗體規(guī)格：100g
線粒體解偶聯(lián)蛋白1(UCP1)elisa試劑盒英文名稱：UCP1 ELISA KitC2CD4D蛋白抗體規(guī)格：25g
線粒體肌酸激酶1A(CKMT1A)elisa試劑盒英文名稱：CKMT1A ELISA Kit二硫鍵氧化還原酶鋅指蛋白5抗體規(guī)格：1g
纖維介素蛋白(FGL2)elisa試劑盒英文名稱：FGL2 ELISA KitL-型電壓依賴型鈣通道β抗體規(guī)格：1g
纖維膠凝蛋白1(FCN1)elisa試劑盒英文名稱：FCN1 ELISA Kit過氧化氫酶抗體規(guī)格：5g
纖維蛋白原相關蛋白1(FGL1)elisa試劑盒英文名稱：FGL1 ELISA Kit色素P450 2C19抗體規(guī)格：1g
纖維蛋白原降解產物(FDP)elisa試劑盒英文名稱：FDP ELISA Kit心肌特異性肌鈣蛋白T抗體規(guī)格：25g
纖維蛋白原β(FGβ)elisa試劑盒英文名稱：FGβ ELISA KitCD161抗體規(guī)格：5g
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