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上海莼試生物技術(shù)有限公司
主營(yíng)產(chǎn)品: ELISA試劑盒,ELISA試劑盒價(jià)格,ELISA試劑盒報(bào)價(jià) |
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公司信息
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- 地址:
- 上海市嘉定區(qū)嘉羅公路1661號(hào)
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參考價(jià) | 面議 |
- 型號(hào) 48T 0.1PCR管
- 品牌 其他品牌
- 廠(chǎng)商性質(zhì) 經(jīng)銷(xiāo)商
- 所在地 上海市
更新時(shí)間:2021-07-16 11:29:20瀏覽次數(shù):199
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參數(shù)規(guī)格:
產(chǎn)品名稱(chēng):CaMV35S基因PCR檢測(cè)試劑盒
產(chǎn)品貨號(hào):CP100182
產(chǎn)品規(guī)格:48T 0.1PCR管/48T 0.2PCR管/48T 0.2PCR管
產(chǎn)品分類(lèi):PCR-熒光探針?lè)?/span>
產(chǎn)品運(yùn)輸:低溫運(yùn)輸
產(chǎn)品保存:-20℃保存
產(chǎn)品有效期:一年
產(chǎn)品特點(diǎn):本產(chǎn)品就是根據(jù)保守區(qū)設(shè)計(jì)引物而開(kāi)發(fā)的高靈敏熒光定量 PCR 產(chǎn)品。
PCR反應(yīng)鑒定——PCR反應(yīng)條件:
循環(huán)步驟 | 溫度 | 時(shí)間 | 循環(huán)數(shù) |
預(yù)變性 | 94℃ | 5 min | 1 |
變性 | 94℃ | 10 sec | 30-40 |
退火 | 50-65℃ | 20 sec | 30-40 |
延伸 | 72℃ | 30 sec/kb | 30-40 |
終延伸 | 72℃ | 5 min | 1 |
實(shí)驗(yàn)過(guò)程:
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2.對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,而不能從無(wú)到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物??梢允荄NA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此,擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶?
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無(wú)熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃保存。
4.PCR的電泳檢測(cè):如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測(cè)。
實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng):
1)RT-PCR可以檢測(cè)組織、細(xì)胞、血液、細(xì)菌等很多材料,不同的樣本有不同要求,實(shí)驗(yàn)前請(qǐng)充分溝通確認(rèn)實(shí)驗(yàn)方案和樣本情況;
2)客戶(hù)盡可能提供實(shí)驗(yàn)的背景信息、物種、基因準(zhǔn)確的名稱(chēng)和ID號(hào);
3)客戶(hù)盡量不要提供DNA或RNA樣品。
4)樣本保存于液氮或干冰,也可以保存于Trizol液中。
實(shí)時(shí)熒光定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán),利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程,最后通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法。實(shí)時(shí)熒光定量PCR的化學(xué)原理包括探針類(lèi)和非探針類(lèi)兩類(lèi),探針類(lèi)是利用與靶細(xì)胞序列特異性雜交的探針來(lái)指示擴(kuò)增產(chǎn)物的增加,非探針類(lèi)是利用熒光染料或者特異性設(shè)計(jì)的引物來(lái)指示擴(kuò)增的增加。運(yùn)用該技術(shù)可以對(duì)DNA、RNA樣品進(jìn)行定量(包括定量和相對(duì)定量)和定性分析。
主要服務(wù):DNA或RNA的定量分析、基因表達(dá)差異分析、基因分型。
主要技術(shù):引物設(shè)計(jì)、RNA提取、cDNA合成、qPCR。
釀酒酵母C型凝集素結(jié)構(gòu)域家族1成員B抗體Human EFHD2(EF-hand domain-containing protein D2) ELISA Kit人抗磷脂酰酸抗體(IgG)免疫試劑盒
昆明腐霉陽(yáng)離子通道相關(guān)蛋白β亞基抗體Human C9orf140(Protein C9orf140) ELISA Kit人抗磷脂??贵w(APSA)免疫試劑盒
瑞士乳桿菌特異性蛋白57抗體Human TNFRSF12A(Tumor necrosis factor receptor superfamily member 12A) ELISA Kit人抗磷脂酰甘油抗體(IgM)免疫試劑盒
產(chǎn)蛋下降綜合征病L選擇素抗體Human TEC(Tyrosine-protein kinase Tec) ELISA Kit人抗磷脂酰甘油抗體(IgG)免疫試劑盒
毛革蓋菌CD53抗體Human CDH6(Cadherin-6) ELISA Kit人抗磷脂酰甘油抗體(IgA)免疫試劑盒
尖孢鐮孢死亡同源蛋白6抗體Human MC5R(Melanocortin receptor 5) ELISA Kit人抗磷脂酰抗體(IgM)免疫試劑盒
葡萄座腔菌屬氯離子通道KB抗體Human MSH2(DNA mismatch repair protein Msh2) ELISA Kit人抗磷脂??贵w(IgG)免疫試劑盒
毛霉C型凝集素結(jié)構(gòu)域家族12成員A抗體Human ARC(Activity-regulated cytoskeleton-associated protein) ELISA Kit人抗磷脂??贵w(IgA)免疫試劑盒
淺藍(lán)灰曲霉氯離子通道蛋白2抗體Human PDX1(Pancreas/duodenum homeobox protein 1) ELISA Kit人抗磷壁酸抗體(TA)免疫試劑盒
BacillusC型凝集素結(jié)構(gòu)域家族9成員A抗體Human C19orf10(UPF0556 protein C19orf10) ELISA Kit人抗鏈球菌溶血素O抗體(IgM)免疫試劑盒
無(wú)菌藥品 無(wú)菌檢查(陰性) C型凝集素結(jié)構(gòu)域家族9成員A抗體Human UBE3A(Ubiquitin-protein ligase E3A) ELISA Kit人抗鏈球菌溶血素O抗體(IgG)免疫試劑盒
海氏腸球菌腦鈣粘蛋白12抗體Human ENTPD1(Ectonucleoside triphosphate diphosphohydrolase 1) ELISA Kit人抗鏈激酶(SK)抗體免疫試劑盒
pK18mobsacB鈣粘蛋白20抗體Human MAPK8(Mitogen-activated protein kinase 8) ELISA Kit人抗連接素IgG抗體免疫試劑盒
豇豆輪紋病菌鈣粘蛋白29抗體Human CHIA(Acidic mammalian chitinase) ELISA Kit人抗利尿激素V2受體/加壓素受體2(AVPR2)免疫試劑盒
*蛹蟲(chóng)草(北冬蟲(chóng)夏草、北蟲(chóng)草)CD200受體抗體Human AVPR1B(Vasopressin V1b receptor) ELISA Kit人抗利尿激素/血管加壓素/加壓素(ADH/VP/AVP)免疫試劑盒
小白蘑菇鈣粘蛋白26抗體Human LILRB2(Leukocyte immunoglobulin-like receptor subfamily B member 2) ELISA Kit人抗類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎核抗原抗體(RANA)免疫試劑盒
CaMV35S基因PCR檢測(cè)試劑盒: 白淺灰鏈霉菌 質(zhì)量規(guī)格:>12,000U/ml,BC超敏熱休克蛋白60試劑盒丹皮酚磺酸鈉
豬鏈球菌Streptococcus│suis 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR超敏前列腺特異性抗原試劑盒
灰色鏈霉菌Streptomyces│griseus 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品超敏C反應(yīng)蛋白試劑盒長(zhǎng)春
使用方法:
一、樣品DNA的制備
用自選方法提取細(xì)菌樣品DNA。注意:DNA純化方法是決定檢測(cè)靈敏度的關(guān)鍵因素。如果不能很好純化樣品DNA,后面的PCR再靈敏也不能提高整體檢測(cè)靈敏度。
二、制備O157:H7標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)(以10-10E6這6個(gè)10倍稀釋度為例。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行,千萬(wàn)不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原,本產(chǎn)品不提供活體病毒做陽(yáng)性對(duì)照,只提供沒(méi)有傳染性的、可以直接使用的DNA片段作為陽(yáng)性對(duì)照。
1. 標(biāo)記6個(gè)離心管,分別為6,5,4,3,2和1號(hào)。
2. 用帶芯槍頭分別加入45 μL超純水(用帶芯槍頭,下同)。
3. 先將本試劑盒提供的陽(yáng)性對(duì)照用TE緩沖液或超純水10倍梯度稀釋到10E7拷貝/μL(注:請(qǐng)不要將本試劑盒提供的標(biāo)準(zhǔn)品一次性稀釋至10E7拷貝/μL,建議每次稀釋10倍,梯度稀釋至10E7拷貝/μL)。
4. 在6號(hào)管中加入5 μL 10E7拷貝/μL的O157:H7陽(yáng)性對(duì)照(上步稀釋所得),充分震蕩1分鐘,得10E6拷貝/μL的陽(yáng)性對(duì)照。
5. 換槍頭,從6號(hào)管中取5 μL溶液到5號(hào)管中,充分震蕩1分鐘,得10E5拷貝/μL的陽(yáng)性對(duì)照。
6. 換槍頭,從5號(hào)管中取5 μL溶液到4號(hào)管中,重復(fù)上面的操作直到得到6個(gè)稀釋度的陽(yáng)性對(duì)照。
7. NC管中不加任何陽(yáng)性對(duì)照。
8. 從1-6號(hào)管中分別取5 μL和待測(cè)樣品一起進(jìn)行定量PCR(見(jiàn)下步),每個(gè)樣品做3次重復(fù)。PCR后得到每個(gè)陽(yáng)性對(duì)照稀釋樣品的熒光PCR Ct值,并以之為縱軸,以濃度的對(duì)數(shù)值為橫軸,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。