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參數(shù)規(guī)格：
產(chǎn)品名稱：肺炎支原體和肺炎衣原體PCR檢測試劑盒
產(chǎn)品貨號：CP99209
產(chǎn)品規(guī)格：50T
產(chǎn)品分類：熒光PCR法
產(chǎn)品運(yùn)輸：低溫運(yùn)輸
產(chǎn)品保存：-20℃保存
產(chǎn)品有效期：一年
產(chǎn)品特點(diǎn)：本產(chǎn)品就是根據(jù)保守區(qū)設(shè)計(jì)引物而開發(fā)的高靈敏熒光定量 PCR 產(chǎn)品。
PCR反應(yīng)鑒定——PCR反應(yīng)條件:

實(shí)驗(yàn)過程：
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2．對應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此，擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
?
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
      10×PCR buffer             5μl
      dNTP mixl                 4μl
      引物1（10pM）               2μl
      引物2（10PM）              2μl
      Taq酶（2U/μl）            1μl
      DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
     加ddH2O至               50 μl
     視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)：
1）RT-PCR可以檢測組織、細(xì)胞、血液、細(xì)菌等很多材料，不同的樣本有不同要求，實(shí)驗(yàn)前請充分溝通確認(rèn)實(shí)驗(yàn)方案和樣本情況；
2）客戶盡可能提供實(shí)驗(yàn)的背景信息、物種、基因準(zhǔn)確的名稱和ID號；
3）客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。
4）樣本保存于液氮或干冰，也可以保存于Trizol液中。
實(shí)時(shí)熒光定量PCR（quantitative real-time PCR，qPCR）是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號積累實(shí)時(shí)監(jiān)測整個(gè)PCR進(jìn)程，最后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知模板進(jìn)行定量分析的方法。實(shí)時(shí)熒光定量PCR的化學(xué)原理包括探針類和非探針類兩類，探針類是利用與靶細(xì)胞序列特異性雜交的探針來指示擴(kuò)增產(chǎn)物的增加，非探針類是利用熒光染料或者特異性設(shè)計(jì)的引物來指示擴(kuò)增的增加。運(yùn)用該技術(shù)可以對DNA、RNA樣品進(jìn)行定量（包括定量和相對定量）和定性分析。
主要服務(wù)：DNA或RNA的定量分析、基因表達(dá)差異分析、基因分型。
主要技術(shù)：引物設(shè)計(jì)、RNA提取、cDNA合成、qPCR。
血管生成素2(ANGPT2)elisa試劑盒英文名稱：ANGPT2 ELISA Kit間隙連接蛋白43抗體規(guī)格：25g

血管生成素1(ANGPT1)elisa試劑盒英文名稱：ANGPT1 ELISA Kit緊密連接蛋白25抗體規(guī)格：5g

血管內(nèi)皮細(xì)胞蛋白C受體(PROCR)elisa試劑盒英文名稱：PROCR ELISA Kit中心體蛋白78抗體規(guī)格：1g

血管內(nèi)皮生長因子受體3(VEGFR3)elisa試劑盒英文名稱：VEGFR3 ELISA Kit6號染色體開放閱讀框146抗體規(guī)格：25g

血管內(nèi)皮生長因子受體2(VEGFR2)elisa試劑盒英文名稱：VEGFR2 ELISA Kit6號染色體開放閱讀框154抗體規(guī)格：5g

血管內(nèi)皮生長因子受體1(VEGFR1)elisa試劑盒英文名稱：VEGFR1 ELISA Kit9號染色體開放閱讀框16抗體規(guī)格：1g

血管內(nèi)皮生長因子D(VEGFD)elisa試劑盒英文名稱：VEGFD ELISA Kit9號染色體開放閱讀框78抗體規(guī)格：5g

血管內(nèi)皮生長因子C(VEGFC)elisa試劑盒英文名稱：VEGFC ELISA Kit9號染色體開放閱讀框79抗體規(guī)格：25g

血管內(nèi)皮生長因子B(VEGFB)elisa試劑盒英文名稱：VEGFB ELISA Kit9號染色體開放閱讀框84抗體規(guī)格：5g

血管內(nèi)皮生長因子A(VEGFA)elisa試劑盒英文名稱：VEGFA ELISA Kit9號染色體開放閱讀框85抗體規(guī)格：25g

血管內(nèi)皮鈣黏蛋白(CDH5)elisa試劑盒英文名稱：CDH5 ELISA Kit9號染色體開放閱讀框91抗體規(guī)格：5g

血管緊張素Ⅱ(ANGⅡ)elisa試劑盒英文名稱：ANGⅡ ELISA Kit9號染色體開放閱讀框93抗體規(guī)格：100g

血管緊張素Ⅰ(AngⅠ)elisa試劑盒英文名稱：AngⅠ ELISA Kit9號染色體開放閱讀框96抗體規(guī)格：500g

血管非炎性蛋白3(VNN3)elisa試劑盒英文名稱：VNN3 ELISA Kit9號染色體開放閱讀框98抗體規(guī)格：1g

序列相似家族3成員B(FAM3B)elisa試劑盒英文名稱：FAM3B ELISA Kit分裂周期蛋白5樣蛋白抗體規(guī)格：5g
肺炎支原體和肺炎衣原體PCR檢測試劑盒乙酰肝素酶2抗體組織蛋白酶D(CTSD)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)BLC1 ELISA Kit

人血清抗體組織蛋白酶D(CTSD)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)LAB7-2 ELISA Kit

血紅素氧合酶 1/熱休克蛋白32抗體間皮素(MSLN)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)BMPER ELISA Kit

磷酸化HER3受體抗體突觸蛋白2(SYNPO2)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)Bid ELISA Kit

磷酸化組蛋白去乙?；?/font>4/5/7抗體角膜蛋白(KERA)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)MCL1 ELISA Kit

異染色質(zhì)蛋白1-γ抗體正五聚蛋白3(PTX3)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)Bax ELISA Kit

組蛋白H1抗體中間α-球蛋白抑制因子H5(ITIH5)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)SCARA3 ELISA Kit

組蛋白去乙?；?/font>1抗體中間α-球蛋白抑制因子H2(ITIH2)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)ABCG2 ELISA Kit
使用方法：
一、樣品DNA的制備
用自選方法提取細(xì)菌樣品DNA。注意：DNA純化方法是決定檢測靈敏度的關(guān)鍵因素。如果不能很好純化樣品DNA，后面的PCR再靈敏也不能提高整體檢測靈敏度。
二、制備O157:H7標(biāo)準(zhǔn)曲線（以10-10E6這6個(gè)10倍稀釋度為例。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體病毒做陽性對照，只提供沒有傳染性的、可以直接使用的DNA片段作為陽性對照。
1. 標(biāo)記6個(gè)離心管，分別為6，5，4，3，2和1號。
2. 用帶芯槍頭分別加入45 μL超純水（用帶芯槍頭，下同）。
3. 先將本試劑盒提供的陽性對照用TE緩沖液或超純水10倍梯度稀釋到10E7拷貝/μL（注：請不要將本試劑盒提供的標(biāo)準(zhǔn)品一次性稀釋至10E7拷貝/μL，建議每次稀釋10倍，梯度稀釋至10E7拷貝/μL）。
4. 在6號管中加入5 μL 10E7拷貝/μL的O157:H7陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩1分鐘，得10E6拷貝/μL的陽性對照。
5. 換槍頭，從6號管中取5 μL溶液到5號管中，充分震蕩1分鐘，得10E5拷貝/μL的陽性對照。
6. 換槍頭，從5號管中取5 μL溶液到4號管中，重復(fù)上面的操作直到得到6個(gè)稀釋度的陽性對照。
7. NC管中不加任何陽性對照。
8. 從1-6號管中分別取5 μL和待測樣品一起進(jìn)行定量PCR（見下步），每個(gè)樣品做3次重復(fù)。PCR后得到每個(gè)陽性對照稀釋樣品的熒光PCR Ct值，并以之為縱軸，以濃度的對數(shù)值為橫軸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。