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上海莼試生物技術(shù)有限公司
主營產(chǎn)品: ELISA試劑盒,ELISA試劑盒價(jià)格,ELISA試劑盒報(bào)價(jià) |

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公司信息
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- 李小姐
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- 地址:
- 上海市嘉定區(qū)嘉羅公路1661號
- 郵編:
參考價(jià) | 面議 |
- 型號 50T
- 品牌 其他品牌
- 廠商性質(zhì) 經(jīng)銷商
- 所在地 上海市
更新時(shí)間:2021-07-12 12:27:18瀏覽次數(shù):181
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參數(shù)規(guī)格:
產(chǎn)品名稱:肺炎支原體和肺炎衣原體PCR檢測試劑盒
產(chǎn)品貨號:CP99209
產(chǎn)品規(guī)格:50T
產(chǎn)品分類:熒光PCR法
產(chǎn)品運(yùn)輸:低溫運(yùn)輸
產(chǎn)品保存:-20℃保存
產(chǎn)品有效期:一年
產(chǎn)品特點(diǎn):本產(chǎn)品就是根據(jù)保守區(qū)設(shè)計(jì)引物而開發(fā)的高靈敏熒光定量 PCR 產(chǎn)品。
PCR反應(yīng)鑒定——PCR反應(yīng)條件:
循環(huán)步驟 | 溫度 | 時(shí)間 | 循環(huán)數(shù) |
預(yù)變性 | 94℃ | 5 min | 1 |
變性 | 94℃ | 10 sec | 30-40 |
退火 | 50-65℃ | 20 sec | 30-40 |
延伸 | 72℃ | 30 sec/kb | 30-40 |
終延伸 | 72℃ | 5 min | 1 |
實(shí)驗(yàn)過程:
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2.對應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此,擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶?
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng):
1)RT-PCR可以檢測組織、細(xì)胞、血液、細(xì)菌等很多材料,不同的樣本有不同要求,實(shí)驗(yàn)前請充分溝通確認(rèn)實(shí)驗(yàn)方案和樣本情況;
2)客戶盡可能提供實(shí)驗(yàn)的背景信息、物種、基因準(zhǔn)確的名稱和ID號;
3)客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。
4)樣本保存于液氮或干冰,也可以保存于Trizol液中。
實(shí)時(shí)熒光定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán),利用熒光信號積累實(shí)時(shí)監(jiān)測整個(gè)PCR進(jìn)程,最后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知模板進(jìn)行定量分析的方法。實(shí)時(shí)熒光定量PCR的化學(xué)原理包括探針類和非探針類兩類,探針類是利用與靶細(xì)胞序列特異性雜交的探針來指示擴(kuò)增產(chǎn)物的增加,非探針類是利用熒光染料或者特異性設(shè)計(jì)的引物來指示擴(kuò)增的增加。運(yùn)用該技術(shù)可以對DNA、RNA樣品進(jìn)行定量(包括定量和相對定量)和定性分析。
主要服務(wù):DNA或RNA的定量分析、基因表達(dá)差異分析、基因分型。
主要技術(shù):引物設(shè)計(jì)、RNA提取、cDNA合成、qPCR。
血管生成素2(ANGPT2)elisa試劑盒英文名稱:ANGPT2 ELISA Kit間隙連接蛋白43抗體規(guī)格:25g
血管生成素1(ANGPT1)elisa試劑盒英文名稱:ANGPT1 ELISA Kit緊密連接蛋白25抗體規(guī)格:5g
血管內(nèi)皮細(xì)胞蛋白C受體(PROCR)elisa試劑盒英文名稱:PROCR ELISA Kit中心體蛋白78抗體規(guī)格:1g
血管內(nèi)皮生長因子受體3(VEGFR3)elisa試劑盒英文名稱:VEGFR3 ELISA Kit6號染色體開放閱讀框146抗體規(guī)格:25g
血管內(nèi)皮生長因子受體2(VEGFR2)elisa試劑盒英文名稱:VEGFR2 ELISA Kit6號染色體開放閱讀框154抗體規(guī)格:5g
血管內(nèi)皮生長因子受體1(VEGFR1)elisa試劑盒英文名稱:VEGFR1 ELISA Kit9號染色體開放閱讀框16抗體規(guī)格:1g
血管內(nèi)皮生長因子D(VEGFD)elisa試劑盒英文名稱:VEGFD ELISA Kit9號染色體開放閱讀框78抗體規(guī)格:5g
血管內(nèi)皮生長因子C(VEGFC)elisa試劑盒英文名稱:VEGFC ELISA Kit9號染色體開放閱讀框79抗體規(guī)格:25g
血管內(nèi)皮生長因子B(VEGFB)elisa試劑盒英文名稱:VEGFB ELISA Kit9號染色體開放閱讀框84抗體規(guī)格:5g
血管內(nèi)皮生長因子A(VEGFA)elisa試劑盒英文名稱:VEGFA ELISA Kit9號染色體開放閱讀框85抗體規(guī)格:25g
血管內(nèi)皮鈣黏蛋白(CDH5)elisa試劑盒英文名稱:CDH5 ELISA Kit9號染色體開放閱讀框91抗體規(guī)格:5g
血管緊張素Ⅱ(ANGⅡ)elisa試劑盒英文名稱:ANGⅡ ELISA Kit9號染色體開放閱讀框93抗體規(guī)格:100g
血管緊張素Ⅰ(AngⅠ)elisa試劑盒英文名稱:AngⅠ ELISA Kit9號染色體開放閱讀框96抗體規(guī)格:500g
血管非炎性蛋白3(VNN3)elisa試劑盒英文名稱:VNN3 ELISA Kit9號染色體開放閱讀框98抗體規(guī)格:1g
序列相似家族3成員B(FAM3B)elisa試劑盒英文名稱:FAM3B ELISA Kit分裂周期蛋白5樣蛋白抗體規(guī)格:5g
肺炎支原體和肺炎衣原體PCR檢測試劑盒乙酰肝素酶2抗體組織蛋白酶D(CTSD)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)BLC1 ELISA Kit
人血清抗體組織蛋白酶D(CTSD)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)LAB7-2 ELISA Kit
血紅素氧合酶 1/熱休克蛋白32抗體間皮素(MSLN)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)BMPER ELISA Kit
磷酸化HER3受體抗體突觸蛋白2(SYNPO2)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)Bid ELISA Kit
磷酸化組蛋白去乙?;?/font>4/5/7抗體角膜蛋白(KERA)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)MCL1 ELISA Kit
異染色質(zhì)蛋白1-γ抗體正五聚蛋白3(PTX3)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)Bax ELISA Kit
組蛋白H1抗體中間α-球蛋白抑制因子H5(ITIH5)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)SCARA3 ELISA Kit
組蛋白去乙?;?/font>1抗體中間α-球蛋白抑制因子H2(ITIH2)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)ABCG2 ELISA Kit
使用方法:
一、樣品DNA的制備
用自選方法提取細(xì)菌樣品DNA。注意:DNA純化方法是決定檢測靈敏度的關(guān)鍵因素。如果不能很好純化樣品DNA,后面的PCR再靈敏也不能提高整體檢測靈敏度。
二、制備O157:H7標(biāo)準(zhǔn)曲線(以10-10E6這6個(gè)10倍稀釋度為例。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原,本產(chǎn)品不提供活體病毒做陽性對照,只提供沒有傳染性的、可以直接使用的DNA片段作為陽性對照。
1. 標(biāo)記6個(gè)離心管,分別為6,5,4,3,2和1號。
2. 用帶芯槍頭分別加入45 μL超純水(用帶芯槍頭,下同)。
3. 先將本試劑盒提供的陽性對照用TE緩沖液或超純水10倍梯度稀釋到10E7拷貝/μL(注:請不要將本試劑盒提供的標(biāo)準(zhǔn)品一次性稀釋至10E7拷貝/μL,建議每次稀釋10倍,梯度稀釋至10E7拷貝/μL)。
4. 在6號管中加入5 μL 10E7拷貝/μL的O157:H7陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩1分鐘,得10E6拷貝/μL的陽性對照。
5. 換槍頭,從6號管中取5 μL溶液到5號管中,充分震蕩1分鐘,得10E5拷貝/μL的陽性對照。
6. 換槍頭,從5號管中取5 μL溶液到4號管中,重復(fù)上面的操作直到得到6個(gè)稀釋度的陽性對照。
7. NC管中不加任何陽性對照。
8. 從1-6號管中分別取5 μL和待測樣品一起進(jìn)行定量PCR(見下步),每個(gè)樣品做3次重復(fù)。PCR后得到每個(gè)陽性對照稀釋樣品的熒光PCR Ct值,并以之為縱軸,以濃度的對數(shù)值為橫軸,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。