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上海莼試生物技術(shù)有限公司
主營(yíng)產(chǎn)品: ELISA試劑盒,ELISA試劑盒價(jià)格,ELISA試劑盒報(bào)價(jià) |
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- 上海市嘉定區(qū)嘉羅公路1661號(hào)
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參考價(jià) | 面議 |
- 型號(hào) 50T
- 品牌 其他品牌
- 廠商性質(zhì) 經(jīng)銷商
- 所在地 上海市
更新時(shí)間:2021-07-16 10:28:25瀏覽次數(shù):229
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參數(shù)規(guī)格:
產(chǎn)品名稱:促生長(zhǎng)轉(zhuǎn)ScGH基因成分PCR檢測(cè)試劑盒
產(chǎn)品貨號(hào):CP100023
產(chǎn)品規(guī)格:50T
產(chǎn)品分類:熒光-PCR法
產(chǎn)品運(yùn)輸:低溫運(yùn)輸
產(chǎn)品保存:-20℃保存
產(chǎn)品有效期:一年
產(chǎn)品特點(diǎn):本產(chǎn)品就是根據(jù)保守區(qū)設(shè)計(jì)引物而開(kāi)發(fā)的高靈敏熒光定量 PCR 產(chǎn)品。
PCR反應(yīng)鑒定——PCR反應(yīng)條件:
循環(huán)步驟 | 溫度 | 時(shí)間 | 循環(huán)數(shù) |
預(yù)變性 | 94℃ | 5 min | 1 |
變性 | 94℃ | 10 sec | 30-40 |
退火 | 50-65℃ | 20 sec | 30-40 |
延伸 | 72℃ | 30 sec/kb | 30-40 |
終延伸 | 72℃ | 5 min | 1 |
實(shí)驗(yàn)過(guò)程:
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2.對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,而不能從無(wú)到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物??梢允荄NA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此,擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶?
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無(wú)熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃保存。
4.PCR的電泳檢測(cè):如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測(cè)。
實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng):
1)RT-PCR可以檢測(cè)組織、細(xì)胞、血液、細(xì)菌等很多材料,不同的樣本有不同要求,實(shí)驗(yàn)前請(qǐng)充分溝通確認(rèn)實(shí)驗(yàn)方案和樣本情況;
2)客戶盡可能提供實(shí)驗(yàn)的背景信息、物種、基因準(zhǔn)確的名稱和ID號(hào);
3)客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。
4)樣本保存于液氮或干冰,也可以保存于Trizol液中。
實(shí)時(shí)熒光定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán),利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程,最后通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法。實(shí)時(shí)熒光定量PCR的化學(xué)原理包括探針類和非探針類兩類,探針類是利用與靶細(xì)胞序列特異性雜交的探針來(lái)指示擴(kuò)增產(chǎn)物的增加,非探針類是利用熒光染料或者特異性設(shè)計(jì)的引物來(lái)指示擴(kuò)增的增加。運(yùn)用該技術(shù)可以對(duì)DNA、RNA樣品進(jìn)行定量(包括定量和相對(duì)定量)和定性分析。
主要服務(wù):DNA或RNA的定量分析、基因表達(dá)差異分析、基因分型。
主要技術(shù):引物設(shè)計(jì)、RNA提取、cDNA合成、qPCR。
假單胞菌胰羧肽酶B1抗體Human CEP63 ELISA Kit山羊促卵泡素(FSH)免疫試劑盒
蕈狀芽孢桿菌維甲酸結(jié)合蛋白2抗體Human CARS (Cysteine–tRNA ligase, cytoplasmic) ELISA Kit山羊促甲狀腺素(TSH)免疫試劑盒
亞鉤針孔菌2號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框80抗體Human CSNK1D(Casein Kinase 1 delta) ELISA Kit山羊雌激素(E)免疫試劑盒
卡伍爾鏈霉菌磷酸化CD32B抗體Human CCT3 ELISA Kit山羊雌二(E2)免疫試劑盒
帕氏食氫產(chǎn)水菌過(guò)敏素C3(補(bǔ)體C3)抗體Human CD1A ELISA Kit山羊超氧化物歧化酶2,線粒體(SOD2)免疫試劑盒
雀斑蘑菇癌胚抗原相關(guān)粘附分子抗體Human CASP6(Caspase 6) ELISA Kit山羊超氧化物歧化酶1,可溶性(SOD1)免疫試劑盒
黑曲霉質(zhì)多聚腺苷酸結(jié)合蛋白1抗體Human CD209 ELISA Kit山羊超氧化物歧化酶(SOD)免疫試劑盒
浸麻類芽孢桿菌半蛋白酶抑制劑7抗體Human Cathepsin H ELISA Kit山羊補(bǔ)體蛋白4(C4)免疫試劑盒
伯頓畢赤酵母22號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框29抗體Human CCDC158 (Coiled-coil domain-containing protein 158) ELISA Kit山羊補(bǔ)體蛋白3(C3)免疫試劑盒
解烷烴游動(dòng)微菌神經(jīng)表面蛋白F3Human CBP20 (NCBP 20 kDa subunit) ELISA Kit山羊二(MDA)免疫試劑盒
盤(pán)長(zhǎng)孢狀盤(pán)孢組織蛋白酶C抗體Human CCDC83 ELISA Kit山羊胞外超氧化物歧化酶[Cu-Zn](SOD3)免疫試劑盒
Microvirga aerophila 半胱酸蛋白酶蛋白-4抗體Human CCDC25 (Coiled-coil domain-containing protein 25) ELISA Kit山羊白介素8(IL-8/CXCL8)免疫試劑盒
玫瑰綠色鏈霉菌活化半胱酸蛋白酶蛋白3抗體Human CCKBR(Gastrin/cholecystokinin type B receptor) ELISA Kit山羊白介素6(IL-6)免疫試劑盒
魔鬼弧菌7號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框61抗體Human CCNI2 ELISA Kit山羊白介素4(IL-4)免疫試劑盒
溥硬皮馬勃少突膠質(zhì)跨膜蛋白抗體Human CAMK2D(CaMKII delta) ELISA Kit山羊白介素2受體(IL-2R)免疫試劑盒
鉤狀木霉激分子B7-1蛋白抗體Human CaMKIV (Calcium/calmodulin-dependent protein kinase type IV) ELISA Kit山羊白介素2(IL-2)免疫試劑盒
促生長(zhǎng)轉(zhuǎn)ScGH基因成分PCR檢測(cè)試劑盒: 創(chuàng)傷弧菌 質(zhì)量規(guī)格:>98%,EP7.3,BR抗凝脂試劑盒芳樟;Linalool
安徽黃桿菌Flavobacterium│anhuiense 質(zhì)量規(guī)格:>98%,標(biāo)準(zhǔn)品抗凝血素抗體試劑盒番瀉苷元B;Sennidin B
可可鏈霉菌阿索變種Streptomyces│cacaoi var.asoensis 質(zhì)量規(guī)格:Enzyme activity>330萬(wàn)抗-磷脂酰復(fù)合物試劑盒番瀉苷元A;Sennidin A
克魯斯假絲酵母Candida│krusei 質(zhì)量規(guī)格:>99%抗III試劑盒扶桑甾;beta-rosasterol
使用方法:
一、樣品DNA的制備
用自選方法提取細(xì)菌樣品DNA。注意:DNA純化方法是決定檢測(cè)靈敏度的關(guān)鍵因素。如果不能很好純化樣品DNA,后面的PCR再靈敏也不能提高整體檢測(cè)靈敏度。
二、制備O157:H7標(biāo)準(zhǔn)曲線(以10-10E6這6個(gè)10倍稀釋度為例。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行,千萬(wàn)不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原,本產(chǎn)品不提供活體病毒做陽(yáng)性對(duì)照,只提供沒(méi)有傳染性的、可以直接使用的DNA片段作為陽(yáng)性對(duì)照。
1. 標(biāo)記6個(gè)離心管,分別為6,5,4,3,2和1號(hào)。
2. 用帶芯槍頭分別加入45 μL超純水(用帶芯槍頭,下同)。
3. 先將本試劑盒提供的陽(yáng)性對(duì)照用TE緩沖液或超純水10倍梯度稀釋到10E7拷貝/μL(注:請(qǐng)不要將本試劑盒提供的標(biāo)準(zhǔn)品一次性稀釋至10E7拷貝/μL,建議每次稀釋10倍,梯度稀釋至10E7拷貝/μL)。
4. 在6號(hào)管中加入5 μL 10E7拷貝/μL的O157:H7陽(yáng)性對(duì)照(上步稀釋所得),充分震蕩1分鐘,得10E6拷貝/μL的陽(yáng)性對(duì)照。
5. 換槍頭,從6號(hào)管中取5 μL溶液到5號(hào)管中,充分震蕩1分鐘,得10E5拷貝/μL的陽(yáng)性對(duì)照。
6. 換槍頭,從5號(hào)管中取5 μL溶液到4號(hào)管中,重復(fù)上面的操作直到得到6個(gè)稀釋度的陽(yáng)性對(duì)照。
7. NC管中不加任何陽(yáng)性對(duì)照。
8. 從1-6號(hào)管中分別取5 μL和待測(cè)樣品一起進(jìn)行定量PCR(見(jiàn)下步),每個(gè)樣品做3次重復(fù)。PCR后得到每個(gè)陽(yáng)性對(duì)照稀釋樣品的熒光PCR Ct值,并以之為縱軸,以濃度的對(duì)數(shù)值為橫軸,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。