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上海莼試生物技術有限公司
主營產品： ELISA試劑盒,ELISA試劑盒價格，ELISA試劑盒報價 |
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- 型號 50T
- 品牌 其他品牌
- 廠商性質 經銷商
- 所在地 上海市
更新時間：2021-07-12 15:37:34瀏覽次數：206
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實時熒光定量PCR（quantitative real-time PCR，qPCR）是指在PCR反應體系中加入熒光基團，利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進程，最后通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。實時熒光定量PCR的化學原理包括探針類和非探針類兩類，探針類是利用與靶細胞序列特異性雜交的探針來指示擴增產物的增加，非探針類是利用熒光染料或者特異性設計的引物來指示擴增的增加。運用該技術可以對DNA、RNA樣品進行定量（包括定量和相對定量）和定性分析。
主要服務：DNA或RNA的定量分析、基因表達差異分析、基因分型。
主要技術：引物設計、RNA提取、cDNA合成、qPCR。
參數規(guī)格：
產品名稱：登革熱病毒PCR檢測試劑盒
產品貨號：CP99715
產品規(guī)格：DGV1、 DGV2、DGV3、DGV4
產品分類：PCR熔解曲線法
產品運輸：低溫運輸
產品保存：-20℃保存
產品有效期：一年
產品特點：本產品就是根據保守區(qū)設計引物而開發(fā)的高靈敏熒光定量 PCR 產品。
PCR反應鑒定——PCR反應條件:
循環(huán)步驟 | 溫度 | 時間 | 循環(huán)數 |
預變性 | 94℃ | 5 min | 1 |
變性 | 94℃ | 10 sec | 30-40 |
退火 | 50-65℃ | 20 sec | 30-40 |
延伸 | 72℃ | 30 sec/kb | 30-40 |
終延伸 | 72℃ | 5 min | 1 |
實驗過程：
一、試劑準備
1. DNA模板
2．對應目的基因的特異引物（在PCR反應中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據你的模板鏈設計。因此，擴增不同的基因需要設計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
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二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1（10pM） 2μl
引物2（10PM） 2μl
Taq酶（2U/μl） 1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl） 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結束反應，PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
實驗注意事項：
1）RT-PCR可以檢測組織、細胞、血液、細菌等很多材料，不同的樣本有不同要求，實驗前請充分溝通確認實驗方案和樣本情況；
2）客戶盡可能提供實驗的背景信息、物種、基因準確的名稱和ID號；
3）客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。
4）樣本保存于液氮或干冰，也可以保存于Trizol液中。
使用方法：
一、樣品DNA的制備
用自選方法提取細菌樣品DNA。注意：DNA純化方法是決定檢測靈敏度的關鍵因素。如果不能很好純化樣品DNA，后面的PCR再靈敏也不能提高整體檢測靈敏度。
二、制備O157:H7標準曲線（以10-10E6這6個10倍稀釋度為例。由于標準品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產品穩(wěn)定性和避免擴散傳染性病原，本產品不提供活體病毒做陽性對照，只提供沒有傳染性的、可以直接使用的DNA片段作為陽性對照。
1. 標記6個離心管，分別為6，5，4，3，2和1號。
2. 用帶芯槍頭分別加入45 μL超純水（用帶芯槍頭，下同）。
3. 先將本試劑盒提供的陽性對照用TE緩沖液或超純水10倍梯度稀釋到10E7拷貝/μL（注：請不要將本試劑盒提供的標準品一次性稀釋至10E7拷貝/μL，建議每次稀釋10倍，梯度稀釋至10E7拷貝/μL）。
4. 在6號管中加入5 μL 10E7拷貝/μL的O157:H7陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩1分鐘，得10E6拷貝/μL的陽性對照。
5. 換槍頭，從6號管中取5 μL溶液到5號管中，充分震蕩1分鐘，得10E5拷貝/μL的陽性對照。
6. 換槍頭，從5號管中取5 μL溶液到4號管中，重復上面的操作直到得到6個稀釋度的陽性對照。
7. NC管中不加任何陽性對照。
8. 從1-6號管中分別取5 μL和待測樣品一起進行定量PCR（見下步），每個樣品做3次重復。PCR后得到每個陽性對照稀釋樣品的熒光PCR Ct值，并以之為縱軸，以濃度的對數值為橫軸，繪制標準曲線。
芝麻林素（標準品）英文名稱： 2-Methyl-5-nitroimidazoleNADPH oxidase 3抗體規(guī)格：5g
芝麻素(標準品)英文名稱： Dihydralazine sulphateNADPH氧化酶NOX家族的成員4抗體規(guī)格：5g
知母（標準品）英文名稱： Amitriptyline HCl 分裂周期相關蛋白1抗體規(guī)格：1g
知母皂苷A1英文名稱： IPRATROPIUM BROMIDENFAM1抗體規(guī)格：5g
知母皂苷A3（標準品）英文名稱： DL-Lysine Acetylsalicylate環(huán)指蛋白67抗體規(guī)格：100ml
知母皂苷BII（標準品）英文名稱： Guaifenesin神經母瘤抑瘤蛋白1抗體規(guī)格：25ml
知母皂苷E(標準品)英文名稱： Cloperastine hydrochloride嗜中性粒胞漿因子1抗體規(guī)格：5ml
梔子（標準品）英文名稱： Mannitol；D-Mannitol線粒體復合物NDUFS3蛋白抗體規(guī)格：1g
蜘蛛香（標準品）英文名稱： Mannitol；D-Mannitol雄激素受體復合物相關蛋白/核受體相互作用蛋白抗體規(guī)格：5g
植酸(標準品)英文名稱： Elacridar;GF120918;GW09189號染色體開放閱讀框156抗體規(guī)格：1g
止瀉木子（標準品）英文名稱： Venlaine hydrochloride核因子活化T胞漿蛋白3抗體規(guī)格：25g
枳殼（標準品）英文名稱： Venlaine hydrochloride干轉錄因子NANOGP8抗體規(guī)格：5g
枳實（酸橙）（標準品）英文名稱： Protoporphyrin IX神經凋亡抑制蛋白抗體規(guī)格：1g
制何首烏（標準品）英文名稱： Ropivacaine mesylate樣蛋白2抗體規(guī)格：25g
（草珊瑚）（標準品）英文名稱： Ropivacaine mesylateSNF1/AMP激酶相關激酶2抗體規(guī)格：5g
登革熱病毒PCR檢測試劑盒NCI-H23(人非小肺癌) 5×106cells/瓶×2 THP-1(單核白血病)
CL-0386MPC-11(小鼠漿瘤)5×106cells/瓶×2
EFNB1 Others Rat 大鼠 Ephrin-B1 / EFNB1 人裂解液 (陽性對照)
EJ人膀胱癌 Human bladder cancer cell line EJ 1640+10% FBS
IL36B Protein Mouse 重組小鼠 IL1F8 / IL36b 蛋白
小鼠氣管平滑肌*培養(yǎng)基 100mL
MR(Mineralocorticoid receptor) 鹽皮質激素受體抗體規(guī)格： 0.2ml
MRP1 多藥耐藥相關蛋白1抗體規(guī)格： 0.1ml
MRP2 多藥耐藥相關蛋白2抗體規(guī)格： 0.1ml
MRP3 多藥耐藥相關蛋白3抗體規(guī)格： 0.1ml
MRP4/ABCC4 多藥耐藥相關蛋白4抗體規(guī)格： 0.1ml
