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實(shí)時(shí)熒光定量PCR（quantitative real-time PCR，qPCR）是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測整個(gè)PCR進(jìn)程，最后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法。實(shí)時(shí)熒光定量PCR的化學(xué)原理包括探針類和非探針類兩類，探針類是利用與靶細(xì)胞序列特異性雜交的探針來指示擴(kuò)增產(chǎn)物的增加，非探針類是利用熒光染料或者特異性設(shè)計(jì)的引物來指示擴(kuò)增的增加。運(yùn)用該技術(shù)可以對(duì)DNA、RNA樣品進(jìn)行定量（包括定量和相對(duì)定量）和定性分析。
主要服務(wù)：DNA或RNA的定量分析、基因表達(dá)差異分析、基因分型。
主要技術(shù)：引物設(shè)計(jì)、RNA提取、cDNA合成、qPCR。
參數(shù)規(guī)格：
產(chǎn)品名稱：艱難梭菌(TCD-B)定性PCR檢測試劑盒
產(chǎn)品貨號(hào)：CP100157
產(chǎn)品規(guī)格：50T
產(chǎn)品分類：PCR法
產(chǎn)品運(yùn)輸：低溫運(yùn)輸
產(chǎn)品保存：-20℃保存
產(chǎn)品有效期：一年
產(chǎn)品特點(diǎn)：本產(chǎn)品就是根據(jù)保守區(qū)設(shè)計(jì)引物而開發(fā)的高靈敏熒光定量 PCR 產(chǎn)品。
PCR反應(yīng)鑒定——PCR反應(yīng)條件:

實(shí)驗(yàn)過程：
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2．對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此，擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
?
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
      10×PCR buffer             5μl
      dNTP mixl                 4μl
      引物1（10pM）               2μl
      引物2（10PM）              2μl
      Taq酶（2U/μl）            1μl
      DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
     加ddH2O至               50 μl
     視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)：
1）RT-PCR可以檢測組織、細(xì)胞、血液、細(xì)菌等很多材料，不同的樣本有不同要求，實(shí)驗(yàn)前請(qǐng)充分溝通確認(rèn)實(shí)驗(yàn)方案和樣本情況；
2）客戶盡可能提供實(shí)驗(yàn)的背景信息、物種、基因準(zhǔn)確的名稱和ID號(hào)；
3）客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。
4）樣本保存于液氮或干冰，也可以保存于Trizol液中。
使用方法：
一、樣品DNA的制備
用自選方法提取細(xì)菌樣品DNA。注意：DNA純化方法是決定檢測靈敏度的關(guān)鍵因素。如果不能很好純化樣品DNA，后面的PCR再靈敏也不能提高整體檢測靈敏度。
二、制備O157:H7標(biāo)準(zhǔn)曲線（以10-10E6這6個(gè)10倍稀釋度為例。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體病毒做陽性對(duì)照，只提供沒有傳染性的、可以直接使用的DNA片段作為陽性對(duì)照。
1. 標(biāo)記6個(gè)離心管，分別為6，5，4，3，2和1號(hào)。
2. 用帶芯槍頭分別加入45 μL超純水（用帶芯槍頭，下同）。
3. 先將本試劑盒提供的陽性對(duì)照用TE緩沖液或超純水10倍梯度稀釋到10E7拷貝/μL（注：請(qǐng)不要將本試劑盒提供的標(biāo)準(zhǔn)品一次性稀釋至10E7拷貝/μL，建議每次稀釋10倍，梯度稀釋至10E7拷貝/μL）。
4. 在6號(hào)管中加入5 μL 10E7拷貝/μL的O157:H7陽性對(duì)照(上步稀釋所得)，充分震蕩1分鐘，得10E6拷貝/μL的陽性對(duì)照。
5. 換槍頭，從6號(hào)管中取5 μL溶液到5號(hào)管中，充分震蕩1分鐘，得10E5拷貝/μL的陽性對(duì)照。
6. 換槍頭，從5號(hào)管中取5 μL溶液到4號(hào)管中，重復(fù)上面的操作直到得到6個(gè)稀釋度的陽性對(duì)照。
7. NC管中不加任何陽性對(duì)照。
8. 從1-6號(hào)管中分別取5 μL和待測樣品一起進(jìn)行定量PCR（見下步），每個(gè)樣品做3次重復(fù)。PCR后得到每個(gè)陽性對(duì)照稀釋樣品的熒光PCR Ct值，并以之為縱軸，以濃度的對(duì)數(shù)值為橫軸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
漏斗狀側(cè)耳（鳳尾菇）卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白125抗體Human DPYD(Dihydropyrimidine Dehydrogenase) ELISA Kit人免疫抑制性糖蛋白免疫試劑盒

貝爾氏菌屬卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白50抗體Human DSE(Dermatan Sulfate Epimerase) ELISA Kit重鏈可變區(qū)(IgHV)免疫試劑盒

類黃假單胞菌卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白90A抗體Human DPT(Dermatopontin) ELISA Kit重鏈(IgH)免疫試劑盒

葡萄座腔菌卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白71抗體Human DPP6(Dipeptidyl Peptidase VI) ELISA Kit輕鏈lambda(λ-IgLC)免疫試劑盒

粗糙脈孢菌卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白37抗體Human DPYD(Dihydropyrimidine Dehydrogenase) ELISA Kit輕鏈kappa(κ-IgLC)免疫試劑盒

喜堿運(yùn)動(dòng)節(jié)桿菌卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白47抗體Human DSE(Dermatan Sulfate Epimerase) ELISA Kit結(jié)合蛋白(BIP)免疫試劑盒

蠟樣狀芽孢桿菌卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白17抗體Human DSP(Desmoplakin) ELISA Kitγ-1 鏈C 區(qū)(IGHGI)免疫試劑盒

豬放線桿菌卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白58抗體Human DR-70TM(Tumor Marker DR-70 For Lung Cancer) ELISA KitM(IgM)免疫試劑盒

膜醭畢赤酵母卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白94抗體Human CX43(Connexin 43) ELISA Kitj鏈(Ig-j)免疫試劑盒

蘇云金芽胞桿菌卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白82抗體Human DBP/DNA Binding Protein(DNA Binding Protein) ELISA KitG4(IgG4)免疫試劑盒

羊肚伴生菌CDK5激活結(jié)合蛋白2抗體Human EAR2(Eosinophil Associated Ribonuclease A family Member 2) ELISA KitG(IgG)免疫試劑盒

黃棕色鏈霉菌CDK2相互作用蛋白抗體Human Dyn(Big Dynorphin) ELISA KitG Fc片段(Fcγ)免疫試劑盒

德爾布有孢酵母周期蛋白依賴性激酶14抗體Human CYSLTR2(Cysteinyl Leukotriene Receptor 2) ELISA KitG Fc段受體Ⅲ(FcγRⅢ/CD16)免疫試劑盒

乳桿菌癌胚抗原相關(guān)粘附分子19抗體Human CSF2Rβ(Colony Stimulating Factor 2 Receptor Beta) ELISA KitG Fc段受體Ⅱ(FcγRⅡ/CD32)免疫試劑盒

扭曲毛殼先天性紅生成異常性貧血蛋白1抗體Human DGAT1(Diacylglycerol O-acyltransferase 1) ELISA KitG Fc段受體Ⅰ(FcγRⅠ/CD64)免疫試劑盒

*蛹蟲草癌胚抗原相關(guān)粘附分子16抗體Human CSNK2A2(Casein Kinase 2, alpha 2 Polypeptide) ELISA KitE(IgE)免疫試劑盒
艱難梭菌(TCD-B)定性PCR檢測試劑盒溶藻弧菌Vibrio│alginolyticus 質(zhì)量規(guī)格：分子量5,000~7,000,分子生物學(xué)級(jí)反狀腺原氨酸試劑盒西伯利亞遠(yuǎn)志糖A5

巴斯德畢赤酵母Pichia│pastoris 質(zhì)量規(guī)格：CP法尼基二磷酸法尼基轉(zhuǎn)移酶1試劑盒牡丹皮苷C

列斯克鏈霉菌Streptomyces│lavendulae subsp. Grasserius 質(zhì)量規(guī)格：>98%,分子生物學(xué)級(jí)法尼X受體試劑盒苯甲酰氧化芍藥苷

根瘤菌Rhizobium│sp. 質(zhì)量規(guī)格：FMB Grade二?；视驮噭┖械てし有萝?/span>

欽海特德沃斯氏菌Devosia│chinhatensis 質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR二肽基肽酶Ⅳ試劑盒4-β-D-葡萄糖基-1,3,7-三羥基

釀酒酵母Saccharomyces│cerevisiae 質(zhì)量規(guī)格：>99%,分子生物學(xué)級(jí)二氫嘧啶脫氫酶[NADP+]試劑盒7-O-甲基杧果苷

假單胞菌Pseudomonas│sp. 質(zhì)量規(guī)格：> 99%,BR二氫嘧啶酶樣3試劑盒北美芹素

沙門氏菌Salmonella│sp. 質(zhì)量規(guī)格：藥用級(jí),膠強(qiáng)度 ~240 g Bloom二氫嘧啶酶樣2試劑盒丹皮酚原苷

孔球孢Gilmaniella│sp. 質(zhì)量規(guī)格：Bacto;BD212750二羥基賴正己氨酸試劑盒管花苷A