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參數(shù)規(guī)格：
產(chǎn)品名稱：土拉弗朗西斯菌PCR檢測試劑盒
產(chǎn)品貨號：CP99423
產(chǎn)品規(guī)格：50T
產(chǎn)品分類：熒光PCR法
產(chǎn)品運(yùn)輸：低溫運(yùn)輸
產(chǎn)品保存：-20℃保存
產(chǎn)品有效期：一年
產(chǎn)品特點(diǎn)：本產(chǎn)品就是根據(jù)保守區(qū)設(shè)計引物而開發(fā)的高靈敏熒光定量 PCR 產(chǎn)品。
PCR反應(yīng)鑒定——PCR反應(yīng)條件:

實(shí)驗過程：
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2．對應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計。因此，擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
?
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
      10×PCR buffer             5μl
      dNTP mixl                 4μl
      引物1（10pM）               2μl
      引物2（10PM）              2μl
      Taq酶（2U/μl）            1μl
      DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
     加ddH2O至               50 μl
     視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
實(shí)驗注意事項：
1）RT-PCR可以檢測組織、細(xì)胞、血液、細(xì)菌等很多材料，不同的樣本有不同要求，實(shí)驗前請充分溝通確認(rèn)實(shí)驗方案和樣本情況；
2）客戶盡可能提供實(shí)驗的背景信息、物種、基因準(zhǔn)確的名稱和ID號；
3）客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。
4）樣本保存于液氮或干冰，也可以保存于Trizol液中。
實(shí)時熒光定量PCR（quantitative real-time PCR，qPCR）是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號積累實(shí)時監(jiān)測整個PCR進(jìn)程，最后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知模板進(jìn)行定量分析的方法。實(shí)時熒光定量PCR的化學(xué)原理包括探針類和非探針類兩類，探針類是利用與靶細(xì)胞序列特異性雜交的探針來指示擴(kuò)增產(chǎn)物的增加，非探針類是利用熒光染料或者特異性設(shè)計的引物來指示擴(kuò)增的增加。運(yùn)用該技術(shù)可以對DNA、RNA樣品進(jìn)行定量（包括定量和相對定量）和定性分析。
主要服務(wù)：DNA或RNA的定量分析、基因表達(dá)差異分析、基因分型。
主要技術(shù)：引物設(shè)計、RNA提取、cDNA合成、qPCR。
D-松（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： DL-Lactic acidE3泛素蛋白連接酶EDD抗體規(guī)格：25g

DL-薄荷（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： Ammonium citrate, tribasic胚胎外胚層發(fā)育蛋白EED抗體規(guī)格：5g

Euojaponine D英文名稱： CAS, Chrome azurol S轉(zhuǎn)錄接頭蛋白EP300抗體規(guī)格：25mg

Eupeasaponin I英文名稱： Cytidine-5'-triphosphate (CTP), disodium salt內(nèi)皮脂肪酶抗體規(guī)格：1g

Hederacolchiside A1(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱： CellulaseMYC啟動子結(jié)合蛋白1抗體規(guī)格：250mg

Hederacolchiside E英文名稱： Pyronin Y內(nèi)質(zhì)網(wǎng)蛋白29抗體規(guī)格：100g

Hederagenin 3-O-α-L-rhamnop...英文名稱： Protamine sulfate from Salmom烯脂酰解酶抗體規(guī)格：5MG

Hyponine D英文名稱： BCIP, disodium salt磷酸化4E結(jié)合蛋白1抗體規(guī)格：1g

Hyponine E英文名稱： Copper(II) acetate, hydrate三羥酰脫氫酶抗體規(guī)格：250mg

Indaconitine(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱： Creatine phosphate限制過度增殖相關(guān)蛋白EML4抗體規(guī)格：100g

Karacoline英文名稱： Fructose 1,6-bisphosphate, 3sodium saltETS1相關(guān)蛋白2抗體規(guī)格：25g

L-薄荷(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱： Fructose 1,6-bisphosphate,3sodium saltEFHA1蛋白抗體規(guī)格：5g

L-（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： L-Ammonium tartrate磷酸化轉(zhuǎn)錄因子E2F-1抗體規(guī)格：1g

L-鼠李糖（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： Potassium carbonate, anhydrateEFHC1蛋白抗體規(guī)格：5g

L-細(xì)辛脂素(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱： TaurineEFHC2蛋白抗體規(guī)格：25g
土拉弗朗西斯菌PCR檢測試劑盒地拉羅司(標(biāo)準(zhǔn)品)Deferasirox質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品

地拉羅司,去鐵斯若Deferasirox質(zhì)量規(guī)格：>99.0%

地拉羅司-d4Deferasirox-d4質(zhì)量規(guī)格：美國進(jìn)口

地（標(biāo)準(zhǔn)品）Desloratadine質(zhì)量規(guī)格：UV法含量測定

地-d4Desloratadine-d4質(zhì)量規(guī)格：美國進(jìn)口

地馬格列Managlinat280782-97-0

Demeclocycline質(zhì)量規(guī)格：美國進(jìn)口

地美司鈉-d8Dimesna-d8質(zhì)量規(guī)格：美國進(jìn)口

地美司鈉Dimesna質(zhì)量規(guī)格：美國進(jìn)口

地美溴胺Demecarium56-94-0

地奈德標(biāo)記13C3DesonideLabeled

地瑞拉韋Darunavir質(zhì)量規(guī)格：>98%

地瑞那韋乙醇鹽Darunavir635728-49-3

,（標(biāo)準(zhǔn)品）Dexamethasone質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品

,Dexamethasone質(zhì)量規(guī)格：>99%,BR,可用于培養(yǎng)
使用方法：
一、樣品DNA的制備
用自選方法提取細(xì)菌樣品DNA。注意：DNA純化方法是決定檢測靈敏度的關(guān)鍵因素。如果不能很好純化樣品DNA，后面的PCR再靈敏也不能提高整體檢測靈敏度。
二、制備O157:H7標(biāo)準(zhǔn)曲線（以10-10E6這6個10倍稀釋度為例。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體病毒做陽性對照，只提供沒有傳染性的、可以直接使用的DNA片段作為陽性對照。
1. 標(biāo)記6個離心管，分別為6，5，4，3，2和1號。
2. 用帶芯槍頭分別加入45 μL超純水（用帶芯槍頭，下同）。
3. 先將本試劑盒提供的陽性對照用TE緩沖液或超純水10倍梯度稀釋到10E7拷貝/μL（注：請不要將本試劑盒提供的標(biāo)準(zhǔn)品一次性稀釋至10E7拷貝/μL，建議每次稀釋10倍，梯度稀釋至10E7拷貝/μL）。
4. 在6號管中加入5 μL 10E7拷貝/μL的O157:H7陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩1分鐘，得10E6拷貝/μL的陽性對照。
5. 換槍頭，從6號管中取5 μL溶液到5號管中，充分震蕩1分鐘，得10E5拷貝/μL的陽性對照。
6. 換槍頭，從5號管中取5 μL溶液到4號管中，重復(fù)上面的操作直到得到6個稀釋度的陽性對照。
7. NC管中不加任何陽性對照。
8. 從1-6號管中分別取5 μL和待測樣品一起進(jìn)行定量PCR（見下步），每個樣品做3次重復(fù)。PCR后得到每個陽性對照稀釋樣品的熒光PCR Ct值，并以之為縱軸，以濃度的對數(shù)值為橫軸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。