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實(shí)時(shí)熒光定量PCR（quantitative real-time PCR，qPCR）是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程，最后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法。實(shí)時(shí)熒光定量PCR的化學(xué)原理包括探針類和非探針類兩類，探針類是利用與靶細(xì)胞序列特異性雜交的探針來指示擴(kuò)增產(chǎn)物的增加，非探針類是利用熒光染料或者特異性設(shè)計(jì)的引物來指示擴(kuò)增的增加。運(yùn)用該技術(shù)可以對(duì)DNA、RNA樣品進(jìn)行定量（包括*定量和相對(duì)定量）和定性分析。
主要服務(wù)：DNA或RNA的*定量分析、基因表達(dá)差異分析、基因分型。
主要技術(shù)：引物設(shè)計(jì)、RNA提取、cDNA合成、qPCR。
參數(shù)規(guī)格：
產(chǎn)品名稱：豬圓環(huán)病毒2型(PCV-2)PCR檢測(cè)試劑盒
產(chǎn)品貨號(hào)：CP99768
產(chǎn)品規(guī)格：50T
產(chǎn)品分類：熒光-PCR法
產(chǎn)品運(yùn)輸：低溫運(yùn)輸
產(chǎn)品保存：-20℃保存
產(chǎn)品有效期：一年
產(chǎn)品特點(diǎn)：本產(chǎn)品就是根據(jù)保守區(qū)設(shè)計(jì)引物而開發(fā)的高靈敏熒光定量 PCR 產(chǎn)品。
PCR反應(yīng)鑒定——PCR反應(yīng)條件:

實(shí)驗(yàn)過程：
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2．對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此，擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
?
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
      10×PCR buffer             5μl
      dNTP mixl                 4μl
      引物1（10pM）               2μl
      引物2（10PM）              2μl
      Taq酶（2U/μl）            1μl
      DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
     加ddH2O至               50 μl
     視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃保存。
4．PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測(cè)。
實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)：
1）RT-PCR可以檢測(cè)組織、細(xì)胞、血液、細(xì)菌等很多材料，不同的樣本有不同要求，實(shí)驗(yàn)前請(qǐng)充分溝通確認(rèn)實(shí)驗(yàn)方案和樣本情況；
2）客戶盡可能提供實(shí)驗(yàn)的背景信息、物種、基因準(zhǔn)確的名稱和ID號(hào)；
3）客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。
4）樣本保存于液氮或干冰，也可以保存于Trizol液中。
使用方法：
一、樣品DNA的制備
用自選方法提取細(xì)菌樣品DNA。注意：DNA純化方法是決定檢測(cè)靈敏度的關(guān)鍵因素。如果不能很好純化樣品DNA，后面的PCR再靈敏也不能提高整體檢測(cè)靈敏度。
二、制備O157:H7標(biāo)準(zhǔn)曲線（以10-10E6這6個(gè)10倍稀釋度為例。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體病毒做陽性對(duì)照，只提供沒有傳染性的、可以直接使用的DNA片段作為陽性對(duì)照。
1. 標(biāo)記6個(gè)離心管，分別為6，5，4，3，2和1號(hào)。
2. 用帶芯槍頭分別加入45 μL超純水（*用帶芯槍頭，下同）。
3. 先將本試劑盒提供的陽性對(duì)照用TE緩沖液或超純水10倍梯度稀釋到10E7拷貝/μL（注：請(qǐng)不要將本試劑盒提供的標(biāo)準(zhǔn)品一次性稀釋至10E7拷貝/μL，建議每次稀釋10倍，梯度稀釋至10E7拷貝/μL）。
4. 在6號(hào)管中加入5 μL 10E7拷貝/μL的O157:H7陽性對(duì)照(上步稀釋所得)，充分震蕩1分鐘，得10E6拷貝/μL的陽性對(duì)照。
5. 換槍頭，從6號(hào)管中取5 μL溶液到5號(hào)管中，充分震蕩1分鐘，得10E5拷貝/μL的陽性對(duì)照。
6. 換槍頭，從5號(hào)管中取5 μL溶液到4號(hào)管中，重復(fù)上面的操作直到得到6個(gè)稀釋度的陽性對(duì)照。
7. NC管中不加任何陽性對(duì)照。
8. 從1-6號(hào)管中分別取5 μL和待測(cè)樣品一起進(jìn)行定量PCR（見下步），每個(gè)樣品做3次重復(fù)。PCR后得到每個(gè)陽性對(duì)照稀釋樣品的熒光PCR Ct值，并以之為縱軸，以濃度的對(duì)數(shù)值為橫軸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
鹽酸*英文名稱： Penitrem A from Penicillium palitans胰腺特異轉(zhuǎn)錄因子PTF1A抗體規(guī)格：5g

*英文名稱： Pentaacetyl-β-D-galactopyranose蛋白*磷酸酶PTPσ抗體規(guī)格：5MG

英文名稱： PermutitETS結(jié)構(gòu)域轉(zhuǎn)錄因子FEV抗體規(guī)格：1g

他酮(進(jìn)口)英文名稱： Phenolphthalein diphosphate tetrasodium salt神經(jīng)叢蛋白A3抗體規(guī)格：25g

鹽酸*英文名稱： Phenothiazine磷酸化蛋白*磷酸酶1C抗體規(guī)格：1g

*英文名稱： Phenoxyaceti acid sodium salt*/*蛋白磷酸酶4C抗體規(guī)格：25g

*英文名稱： Phenyl salicylate神經(jīng)元PAS結(jié)構(gòu)域蛋白5抗體規(guī)格：5g

鹽酸貝那替英文名稱： Phospholipase A2 from Crotalus adamanteus Venom蛋白*磷酸酶受體PCPTP1抗體規(guī)格：1g

*英文名稱： p-Hydroxybenzoic acid butyl ester sodium salt植烷酰*羥化酶2相互作用蛋白抗體規(guī)格：25g

*英文名稱： p-Hydroxybenzoic acid ethyl ester sodium salt旁瘤抗原MA1抗體規(guī)格：5g

*英文名稱： p-Hydroxybenzoic acid methyl ester sodium salt大腦蛋白1抗體規(guī)格：1g

*英文名稱： p-Hydroxybenzoic acid propyl ester sodium salt核糖核酸結(jié)合蛋白2抗體規(guī)格：25g

鹽酸卡巴肼/鹽酸基芐肼英文名稱： Pimelic acid磷酸化過氧化酶活化增生受體γ抗體 PPARγ規(guī)格：5g

鹽酸卡特羅英文名稱： Poly(vinylpyrrolidone)–Iodine complex早老素蛋白1+2抗體規(guī)格：25g

鹽酸美卡因英文名稱： Polypropylene glycol 2000豬藍(lán)耳病病抗體規(guī)格：5g
豬圓環(huán)病毒2型(PCV-2)PCR檢測(cè)試劑盒人星形膠質(zhì) (HA) (1×106 ) 小鼠皮層神經(jīng)膠質(zhì)(EGFP標(biāo)記) Mouse

CM-H076人心房肌*培養(yǎng)基100mL

OSM Others Mouse 小鼠 Oncostatin M / OSM 人裂解液 (陽性對(duì)照)

NCI-H929-UBC-EGFP(穩(wěn)定株)人骨髓瘤 NCI-H929-UBC-EGFP (stable sain) human myeloma cell 1640+20% FBS(熱滅活)

IL25 Protein Human 重組人 IL25 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)

小鼠角膜內(nèi)皮*培養(yǎng)基 100mL

Ntn1  軸突導(dǎo)向因子1抗體規(guī)格： 0.2ml

Nur77/GFRP  孤兒核受體蛋白Nur77抗體規(guī)格： 0.2ml

Phospho-Nur77 (Ser351)  磷酸化孤兒核受體蛋白Nur77抗體規(guī)格： 0.1ml

NuMA  核有絲分裂器NuMA蛋白抗體規(guī)格： 0.2ml

Phospho-NuMA (Ser395)  磷酸化核有絲分裂器NuMA蛋白抗體規(guī)格： 0.1ml