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原代細胞培養(yǎng)條件：

?溫度?：通常在37℃下進行，以模擬體內溫度。

?pH值?：培養(yǎng)液的pH值應保持在7.2~7.4之間，以維持細胞的正常生理狀態(tài)。

?氣體環(huán)境?：在含有5% CO2的培養(yǎng)箱中進行，以促進細胞生長。

?培養(yǎng)基?：使用含有適當營養(yǎng)成分的培養(yǎng)基，如Eagle's MEM、DMEM等。

?無菌操作?：整個培養(yǎng)過程需要在無菌條件下進行，以防止污染。

本產品僅供科學實驗研究使用! 不能用于臨床或動物診斷！

細胞簡介：

大鼠關節(jié)囊成纖維分離自關節(jié)囊組織；關節(jié)囊（articular capsule）是由結締組織構成的膜囊，附著于關節(jié)的周圍，密封關節(jié)腔。關節(jié)囊的壁共有兩層：外層為纖維層；內層為滑膜層。纖維層實際上是一個連結骨的骨膜向另一骨骨膜的移行。纖維層厚而堅韌，由致密結締組織構成，含有豐富的血管和神經。其淺層纖維多呈縱行排列；深層纖維主要為環(huán)行纖維。纖維層的厚薄，各個關節(jié)不相同，即是在同一關節(jié)中，各部也不一致一般在運動范圍小的或是負重較大的關節(jié)中，都較厚而緊張，相反，于運動靈活的關節(jié)，則較薄而松弛。有的關節(jié)囊的部分纖維囊缺如，僅一層滑膜層；有的部分明顯增厚，形成韌帶?；颖《釢?，是由疏松結締組織構成，襯在纖維層內面，周緣附著在關節(jié)軟骨的邊緣。它朝向關節(jié)腔的內面光而發(fā)亮，此面上蓋有一層內皮細胞?；は蜿P節(jié)腔分泌滑液，滑液是稍粘稠而透明的液體，可減少關節(jié)中相連骨的摩擦，是一種滑潤劑?；け砻婵尚纬山q毛或皺襞突入關節(jié)腔內。有時滑膜層可以穿過纖維層呈囊狀向外膨出，形成滑膜囊，常位于肌腱與骨面之間。有時滑膜層突出不明顯，僅呈深窩狀，稱為囊狀隱窩。成纖維細胞（Fibroblast）是疏松結締組織的主要細胞成分，由胚胎時期的間充質細胞分化而來；成纖維細胞較大，輪廓清楚，多為突起的紡錘形或星形的扁平狀結構，其細胞核呈規(guī)則的卵圓形，核仁大而明顯。成纖維細胞功能活動旺盛，細胞質嗜弱堿性，具明顯的蛋白質合成和分泌活動，在一定條件下，它可以實現跟纖維細胞的互相轉化；成纖維細胞對不同程度的細胞變性、壞死和組織缺損的修復有著十分重要的作用。剛分離的成纖維細胞呈圓形、折光性良好，懸浮于培養(yǎng)基中。30min細胞貼壁，其中部分開始伸出偽足，表現為小的突起；6h后細胞基本貼壁，伸展成梭形，胞核清晰，分布較均勻，散在生長，不聚集成團；細胞生長迅速，5-7天即呈融合狀態(tài)，細胞排列緊密，有的交叉重疊生長，平坦、胞體較大，細胞質透明，細胞核較大，呈橢圓形，顏色淡。細胞融合，并彼此連接成網狀；細胞呈突起的紡錘形或星形的扁平分布。

方法簡介：

實驗室分離的大鼠關節(jié)囊成纖維經Vimentin免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

質量檢測：

實驗室分離的大鼠關節(jié)囊成纖維采用混合酶消化結合差速貼壁法制備而來，細胞總量約為5×105cells/瓶。

培養(yǎng)信息：

培養(yǎng)基：基礎培養(yǎng)基，含FBS、bFGF、Insulin、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率：每2-3天換液一次

生長特性：貼壁

細胞形態(tài)：成纖維細胞樣

傳代特性：可傳3代左右

消化液：0.25%

培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%

原代細胞培養(yǎng)的具體操作步驟如下：

?組織處理?：將動物組織從機體中取出，剪碎后用等消化酶處理，使其分散成單個細胞。

?細胞計數?：使用血細胞計數器或其他方法對細胞進行計數，確保細胞密度適中。

?接種培養(yǎng)?：將細胞懸液接種到培養(yǎng)瓶中，加入適量的培養(yǎng)基，置于37℃、5% CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

?換液和傳代?：定期更換培養(yǎng)液，當細胞達到一定密度時進行傳代培養(yǎng)，以維持細胞的生長狀態(tài)。

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GREM1重組小鼠 Gremlin 1 / GREM1 蛋白 (His 標簽) Protein

蛋白酶激活受體4(PAR4)重組蛋白 Recombinant Protease Activated Receptor 4 (PAR4)

CFL1重組人 CFL1 / N-cofilin 蛋白 (His 標簽) Protein

FETUB Protein Human 重組人 Fetuin-B / FETUB 蛋白 (His 標簽)

TNFRSF10D Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 TRAIL R4 / CD264 / TNFRSF10D 蛋白 (His 標簽)

大鼠關節(jié)囊成纖維細胞A Beta1-40 (mutation type, MT 0.1mgA Beta1-40 (mutation type, MT) peptide 突變型β淀粉樣肽1-40

FETUB Protein Human 重組人 Fetuin-B / FETUB 蛋白 (His 標簽)

CD83重組小鼠 CD83 / HB15 蛋白 (His 標簽) Protein

IFNG Protein Rat 重組大鼠 IFNG / Interferon Gamma 蛋白 (Fc 標簽)

ABHD14B重組人 ABHD14B 蛋白 (His 標簽) Protein

原代細胞的4種培養(yǎng)方法：

　　① 組織塊培養(yǎng)法

　　組織塊培養(yǎng)是常用、簡便易行和成功率較高的原代培養(yǎng)方法。其基本方法是將剪成的小組織團塊接種于培養(yǎng)瓶(或皿)中，瓶壁可預先涂以膠原薄層，以利于組織塊粘著于瓶壁，使周邊細胞能沿瓶壁向外生長。

　　② 消化培養(yǎng)法

　?、?懸浮細胞培養(yǎng)法

　　對于懸浮生長的細胞，如白血病細胞、淋巴細胞、骨髓細胞、胸水和腹水中的癌細胞和免疫細胞無需消化，可采用低速離心分離，直接培養(yǎng)，或經淋巴細胞分層液分離后接種培養(yǎng)。

　?、芷鞴倥囵B(yǎng)

　　器官培養(yǎng)是指從供體取得器官或組織塊后，不進行組織分離而直接在體外的特定環(huán)境條件下培養(yǎng)，器官培養(yǎng)可保持器官組織的相對完整性，可用于重點觀察細胞間的聯系、排列情況和相互影響，以及局部環(huán)境的生物調節(jié)作用。