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原代細胞培養(yǎng)的具體步驟：

1、準備：取各種已消毒的培養(yǎng)用品置于凈化臺面，紫外線消毒20分鐘。開始工作前先洗手、75%酒精擦拭手至肘部。

2、布局：點燃酒精燈，安裝吸管帽。

3、處理組織：把組織塊置于燒杯中，用Hanks液漂洗2-3次，去除血污；如懷疑組織可能污染，可先置于含有青的混合液中30-60分鐘。

5、消化：或用恒溫水浴，或置于37℃溫箱消化均可，消化中每隔20分鐘應(yīng)搖動一次，如用電磁恒溫攪拌器消化更好。消化時間依組織塊的大小和組織的硬度而定。

6、分離：在消化過程中見消化液發(fā)混濁時，可用吸管吸出少許消化液在鏡下觀察，如組織已分散成細胞團或單個細胞，立即終止消化，隨即通過適宜不銹鋼篩，濾掉尚未充分消化開的組織塊。低速（500-1000轉(zhuǎn)/分）離心消化液5分鐘，吸出上清，加入適量含有血清的培養(yǎng)液。

7、計數(shù)：用計數(shù)板計數(shù)，如細胞懸液細胞密度過大，再補加培養(yǎng)液調(diào)整后，分裝入培養(yǎng)瓶中。對大多數(shù)細胞來說，pH要求在7.2-7.4范圍，培養(yǎng)液呈微紅色，如顏色偏黃，說明液體變酸，可用NaHCO3調(diào)整。

8、培養(yǎng)：置于37℃溫箱培養(yǎng)，如用CO2溫箱培養(yǎng)，瓶口需用紗布棉塞或螺旋帽堵塞，紗布塞易生霉菌，每次換液時需要換新塞。

大鼠關(guān)節(jié)軟骨細胞

商品屬性：

細胞簡介：

大鼠關(guān)節(jié)軟骨分離自關(guān)節(jié)軟骨組織；關(guān)節(jié)軟骨屬于透明軟骨，表面光滑、呈淡藍色、有光澤，它是由一種特殊的叫做致密結(jié)締組織的膠原纖維構(gòu)成的基本框架，這種框架呈半環(huán)形，類似拱形球門，其底端緊緊附著在下面的骨質(zhì)上，上端朝向關(guān)節(jié)面，這種結(jié)構(gòu)使關(guān)節(jié)軟骨緊緊與骨結(jié)合起來而不會掉下來，同時當受到壓力時候，還可以有少許的變形，起到緩沖壓力的作用。在這些纖維之間，散在分布著軟骨細胞，軟骨細胞由淺層向深層逐漸由扁平樣至橢圓或圓形的細胞組成，這些軟骨細胞維持關(guān)節(jié)軟骨的正常代謝。關(guān)節(jié)軟骨沒有神經(jīng)支配，也沒有血管，其營養(yǎng)成分必須從關(guān)節(jié)液中取得，而其代謝廢物也必須排至關(guān)節(jié)液中，關(guān)節(jié)軟骨的這種營養(yǎng)代謝必須通過關(guān)節(jié)運動，使關(guān)節(jié)軟骨不斷的受到壓力刺激才行，所以關(guān)節(jié)運動對于維持關(guān)節(jié)軟骨的正常結(jié)構(gòu)起重要的作用。關(guān)節(jié)軟骨細胞位于關(guān)節(jié)軟骨陷窩內(nèi)。幼稚的關(guān)節(jié)軟骨細胞位于關(guān)節(jié)軟骨組織的表層，單個分布、體積較小、呈橢圓形，長軸與關(guān)節(jié)軟骨表面平行，越向深層的關(guān)節(jié)軟骨細胞體積之間增大呈圓形，細胞核圓形或卵圓形、染色淺，細胞質(zhì)弱嗜堿性，常見數(shù)量不一的脂滴。成熟的關(guān)節(jié)軟骨細胞多2-8個成群分布于關(guān)節(jié)軟骨陷窩內(nèi)，這些關(guān)節(jié)軟骨細胞由同一個母細胞分裂增殖而成，稱為同源細胞群。電鏡下，關(guān)節(jié)軟骨細胞有突起和皺褶，細胞質(zhì)內(nèi)有大量的粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和發(fā)達的高爾基復(fù)合體及少量的線粒體。在組織切片中，關(guān)節(jié)軟骨細胞收縮為不規(guī)則形，在軟骨囊和細胞之間出現(xiàn)較大的腔隙。體外培養(yǎng)的關(guān)節(jié)軟骨細胞對于研究其生理功能、藥物作用以及各種致病因素作用下的病理生理改變具重要意義。

方法簡介：

公司實驗室分離的大鼠關(guān)節(jié)軟骨經(jīng)Ⅱ型膠原蛋白免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

質(zhì)量檢測：

公司實驗室分離的大鼠關(guān)節(jié)軟骨采用膠原酶聯(lián)合蛋白酶消化制備而來，細胞總量約為5×105cells/瓶。

培養(yǎng)信息：

培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每3-4天換液一次

生長特性 貼壁

細胞形態(tài) 梭形、多角形

傳代特性 可傳5代左右；3代以內(nèi)狀態(tài)

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

原代細胞VS細胞系：

用酶或機械方法直接從人或動物組織中分離出來的細胞。嚴格來說，從機體分離出來到傳代之前的細胞稱為原代細胞，絕大部分的原代細胞在體外可以分裂10-15次(這與細胞的端粒長短有關(guān))，再加上取材，成本等因素，通常會把培養(yǎng)的第一代到第十代以內(nèi)的細胞統(tǒng)稱為原代細胞。

原代細胞一般傳至10代左右，大部分細胞衰老死亡，但是有極少數(shù)的細胞能夠度過“危機"而繼續(xù)傳下去，存活的細胞一般能夠傳到40-50代，叫細胞株。當50代以后又會出現(xiàn)“危機"，這時有部分細胞的遺傳物質(zhì)發(fā)生了改變且?guī)в邪┳兊奶攸c，從而可能無限制地傳代下去，稱為細胞系。

也有認為細胞系指原代細胞培養(yǎng)物經(jīng)傳代成功后所繁殖的細胞群體。也指可長期連續(xù)傳代的培養(yǎng)細胞。由此便引申出了后來的有限細胞系、無限細胞系，因此，細胞系狹義的是指可連續(xù)傳代的細胞，廣義是指可傳代的細胞。而細胞株是通過選擇法或克隆形成法，從原代培養(yǎng)物或細胞系中獲得具有特殊性質(zhì)或標志物的單一細胞稱為細胞株。

細胞系具有容易培養(yǎng)、種類多、價格便宜、無限傳代等優(yōu)點，也非常容易在培養(yǎng)、凍存中發(fā)生錯誤鑒定及交叉污染的問題。

公司正在銷售的產(chǎn)品：

豬白介素12(IL-12)ELISA試劑盒 96T/48T

Human ai Sp100 aibody (Sp100) ELISA Kit 人抗sp100抗體(sp100)ELISA試劑盒

PorcineIerleukin18,IL-18ELISAKit 豬白介素18(IL-18)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitforAIF(Humanapoptosisinducingfactor)ELISAKit人凋亡誘導因子規(guī)格：48T/96T

血液/活化II(THROMBIN/FACTORIIa)活性熒光定量檢測試劑盒20次

MouseUbiquitin,UbELISAKit小鼠泛素蛋白(Ub)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

中文名稱   方法   規(guī)格

大鼠固(ALD)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

大鼠去甲上腺素(NA)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

大鼠前列腺素F(PGF)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

豚鼠白三烯D4(LTD4)ELISA 試劑盒

Rat angiotensin II (ANG- II) ELISA Kit 大鼠血管緊張素Ⅱ(ANG-Ⅱ)ELISA試劑盒

humansinglesandedDNAAibody,ssDNAELISAKit 人抗單鏈DNA抗體/變性DNA抗體(ssDNA)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝

HumanCyclin-dependekinase7,CDK-7ELISA試劑盒人周期素依賴性激酶7(CDK-7)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

組織GSK3α激酶活性定量檢測試劑盒(A/B/C)20次

HumanPolymorphonuclearElastase,PMNElastaseELISAKit人多形核白細胞彈性蛋白酶(PMNElastase)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

CD274重組大鼠 PD-L1 / B7-H1 / CD274 蛋白 (His 標簽) Protein

CREB-1 (cAMP responsive element binding protein-1 0.5mgCREB-1 (cAMP responsive element binding protein-1) 環(huán)腺苷酸應(yīng)答元件結(jié)合蛋白(抗原)

CSF3R重組人 G-CSFR / CD114 蛋白 (His 標簽) Protein

AK1 Protein Human 重組人 AK1 / Adenylate kinase 1 蛋白 (His 標簽)

NTRK3 Protein Mouse 重組小鼠 TrkC / NTRK3 蛋白 (His 標簽)

大鼠關(guān)節(jié)軟骨細胞CREB-1 (cAMP responsive element binding protein-1 0.5mgCREB-1 (cAMP responsive element binding protein-1) 環(huán)腺苷酸應(yīng)答元件結(jié)合蛋白(抗原)

AK1 Protein Human 重組人 AK1 / Adenylate kinase 1 蛋白 (His 標簽)

CD274重組大鼠 PD-L1 / B7-H1 / CD274 蛋白 (His 標簽) Protein

NTRK3 Protein Mouse 重組小鼠 TrkC / NTRK3 蛋白 (His 標簽)

CSF3R重組人 G-CSFR / CD114 蛋白 (His 標簽) Protein