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原代細(xì)胞培養(yǎng)的具體步驟：

1、準(zhǔn)備：取各種已消毒的培養(yǎng)用品置于凈化臺(tái)面，紫外線消毒20分鐘。開始工作前先洗手、75%酒精擦拭手至肘部。

2、布局：點(diǎn)燃酒精燈，安裝吸管帽。

3、處理組織：把組織塊置于燒杯中，用Hanks液漂洗2-3次，去除血污；如懷疑組織可能污染，可先置于含有青的混合液中30-60分鐘。

5、消化：或用恒溫水浴，或置于37℃溫箱消化均可，消化中每隔20分鐘應(yīng)搖動(dòng)一次，如用電磁恒溫?cái)嚢杵飨?。消化時(shí)間依組織塊的大小和組織的硬度而定。

6、分離：在消化過程中見消化液發(fā)混濁時(shí)，可用吸管吸出少許消化液在鏡下觀察，如組織已分散成細(xì)胞團(tuán)或單個(gè)細(xì)胞，立即終止消化，隨即通過適宜不銹鋼篩，濾掉尚未充分消化開的組織塊。低速（500-1000轉(zhuǎn)/分）離心消化液5分鐘，吸出上清，加入適量含有血清的培養(yǎng)液。

7、計(jì)數(shù)：用計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)，如細(xì)胞懸液細(xì)胞密度過大，再補(bǔ)加培養(yǎng)液調(diào)整后，分裝入培養(yǎng)瓶中。對(duì)大多數(shù)細(xì)胞來說，pH要求在7.2-7.4范圍，培養(yǎng)液呈微紅色，如顏色偏黃，說明液體變酸，可用NaHCO3調(diào)整。

8、培養(yǎng)：置于37℃溫箱培養(yǎng)，如用CO2溫箱培養(yǎng)，瓶口需用紗布棉塞或螺旋帽堵塞，紗布塞易生霉菌，每次換液時(shí)需要換新塞。

大鼠腦微血管周細(xì)胞

商品屬性：

細(xì)胞簡介：

大鼠腦微血管周分離自腦微血管；大腦分左右兩個(gè)半球，大腦皮質(zhì)（灰質(zhì)）覆蓋著每個(gè)大腦半球的大部分，它是神經(jīng)元胞體集中的地方。內(nèi)部則是由神經(jīng)纖維或髓鞘構(gòu)成的白質(zhì)。每一個(gè)半球都有三個(gè)面，即外側(cè)面（約占整個(gè)皮質(zhì)面積的1/3）、內(nèi)側(cè)面和底面（占2/3的面積）；半球表面有很多深淺不等的溝或裂，溝或裂之間的隆起叫回，它們大大增加了大腦的表面積；大腦外側(cè)面重要的溝、裂有大腦外側(cè)裂、頂枕裂和中央溝。由于三溝裂之界隔，使大腦皮質(zhì)組分為額葉、頂葉、顳葉、枕葉四大部分。周細(xì)胞（pericyte）又稱Rouget細(xì)胞和壁細(xì)胞，是一種包圍全身毛細(xì)血管和靜脈中內(nèi)皮細(xì)胞的細(xì)胞，可以收縮。周細(xì)胞嵌入毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞的基膜中，通過物理接觸和旁分泌信號(hào)與內(nèi)皮細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞通訊，監(jiān)視和穩(wěn)定內(nèi)皮細(xì)胞的成熟過程。此外，周細(xì)胞還具有調(diào)控毛細(xì)血管血流量、細(xì)胞碎屑清除和吞噬以及血腦屏障滲透性的作用，其多功能性是目前研究的熱點(diǎn)之一，所以對(duì)血管周細(xì)胞的生物學(xué)特征、標(biāo)記物、細(xì)胞功能等的研究都為相關(guān)研究提供基礎(chǔ)資料。周細(xì)胞產(chǎn)生手指狀的外延以調(diào)控毛細(xì)血管的血流量。周細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞之間共同擁有一個(gè)基膜，基膜上有多種細(xì)胞連接，包括多種整合素、神經(jīng)鈣黏素、纖連蛋白以及接合素。它還參與毛細(xì)血管直徑的雙向調(diào)控；毛細(xì)血管受損時(shí)，周細(xì)胞還可增殖，分化為內(nèi)皮細(xì)胞和成纖維細(xì)胞。

方法簡介：

公司實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠腦微血管周經(jīng)α-SMA免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

質(zhì)量檢測：

公司實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠腦微血管周采用蛋白酶-膠原酶聯(lián)合消化法制備而來，細(xì)胞總量約為5×105cells/瓶。

培養(yǎng)信息：

包被條件 PLL（0.1mg/ml）

培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細(xì)胞形態(tài) 成纖維細(xì)胞樣

傳代特性 可傳3-5代左右；3代以內(nèi)狀態(tài)

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

原代細(xì)胞VS細(xì)胞系：

用酶或機(jī)械方法直接從人或動(dòng)物組織中分離出來的細(xì)胞。嚴(yán)格來說，從機(jī)體分離出來到傳代之前的細(xì)胞稱為原代細(xì)胞，絕大部分的原代細(xì)胞在體外可以分裂10-15次(這與細(xì)胞的端粒長短有關(guān))，再加上取材，成本等因素，通常會(huì)把培養(yǎng)的第一代到第十代以內(nèi)的細(xì)胞統(tǒng)稱為原代細(xì)胞。

原代細(xì)胞一般傳至10代左右，大部分細(xì)胞衰老死亡，但是有極少數(shù)的細(xì)胞能夠度過“危機(jī)"而繼續(xù)傳下去，存活的細(xì)胞一般能夠傳到40-50代，叫細(xì)胞株。當(dāng)50代以后又會(huì)出現(xiàn)“危機(jī)"，這時(shí)有部分細(xì)胞的遺傳物質(zhì)發(fā)生了改變且?guī)в邪┳兊奶攸c(diǎn)，從而可能無限制地傳代下去，稱為細(xì)胞系。

也有認(rèn)為細(xì)胞系指原代細(xì)胞培養(yǎng)物經(jīng)傳代成功后所繁殖的細(xì)胞群體。也指可長期連續(xù)傳代的培養(yǎng)細(xì)胞。由此便引申出了后來的有限細(xì)胞系、無限細(xì)胞系，因此，細(xì)胞系狹義的是指可連續(xù)傳代的細(xì)胞，廣義是指可傳代的細(xì)胞。而細(xì)胞株是通過選擇法或克隆形成法，從原代培養(yǎng)物或細(xì)胞系中獲得具有特殊性質(zhì)或標(biāo)志物的單一細(xì)胞稱為細(xì)胞株。

細(xì)胞系具有容易培養(yǎng)、種類多、價(jià)格便宜、無限傳代等優(yōu)點(diǎn)，也非常容易在培養(yǎng)、凍存中發(fā)生錯(cuò)誤鑒定及交叉污染的問題。

公司正在銷售的產(chǎn)品：

豬基質(zhì)金屬蛋白酶9(MMP-9)ELISA 試劑盒 96T/48T

Human collectin (Collectin) ELISA Kit 人膠原凝集素(Collectin)ELISA試劑盒

PorcinePulmonarysurfatca-associatedproteinA,SP-AELISAKit 豬肺表面活性物質(zhì)相關(guān)蛋白A(SP-A)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

CLIAKitforAlpha-SCA(HumanAlpha-sarcomericactin)ELISAKit人α橫紋肌肌動(dòng)蛋白規(guī)格：48T/96T

血液甲戊二羥酸激酶(mevalonatekinase)活性比色法定量檢測試劑盒20次

Plaphosphatidicacid,PAELISAKit植物凝脂酸(PA)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

豬凋亡相關(guān)因子elisa試劑盒   豬凋亡相關(guān)因子試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   豬凋亡相關(guān)因子試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：豬凋亡相關(guān)因子試劑盒、豬凋亡相關(guān)因子eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。

試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。

豬膽囊收縮素elisa試劑盒   豬膽囊收縮素試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   豬膽囊收縮素試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：豬膽囊收縮素試劑盒、豬膽囊收縮素eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。

豬單核細(xì)胞增多性李斯特菌素Oelisa試劑盒   豬單核細(xì)胞增多性李斯特菌素O試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   豬單核細(xì)胞增多性李斯特菌素O試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：豬單核細(xì)胞增多性李斯特菌素O試劑盒、豬單核細(xì)胞增多性李斯特菌素Oeisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。

大鼠胱天蛋白酶7(CASP7)ELISA試劑盒 ，英文名： CASP7 ELISA Kit

Rabbit ansforming growth factor beta 2 (TGF beta 2) ELISA Kit 兔轉(zhuǎn)化生長因子β2(TGFβ2)ELISA試劑盒

(OC43/HKU1)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法) 48T

CLIAKitforMMP-3(HumanMaixmetalloproteinase3)ELISAkit人基質(zhì)金屬蛋白酶3規(guī)格：48T/96T

體液基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP-14)活性熒光定量檢測試劑盒20次(10樣本)

ELISAKiBP犬醇結(jié)合蛋白規(guī)格：48T/96T

CADM3重組大鼠 CADM3 / NECL1 / IGSF4B 蛋白 (Fc 標(biāo)簽) Protein

CULLIN (Cdc53/CUL 0.5mgCULLIN (Cdc53/CUL)

NUDT2重組人 NUDT2 / Ap4A hydrolase 蛋白 (His 標(biāo)簽) Protein

ANXA6 Protein Human 重組人 Annexin VI / ANXA6 蛋白 (His 標(biāo)簽)

ACVR2B Protein Mouse 重組小鼠 ACTRIIB / ACVR2B 蛋白 (His 標(biāo)簽)

大鼠腦微血管周細(xì)胞CULLIN (Cdc53/CUL 0.5mgCULLIN (Cdc53/CUL)

ANXA6 Protein Human 重組人 Annexin VI / ANXA6 蛋白 (His 標(biāo)簽)

CADM3重組大鼠 CADM3 / NECL1 / IGSF4B 蛋白 (Fc 標(biāo)簽) Protein

ACVR2B Protein Mouse 重組小鼠 ACTRIIB / ACVR2B 蛋白 (His 標(biāo)簽)

NUDT2重組人 NUDT2 / Ap4A hydrolase 蛋白 (His 標(biāo)簽) Protein