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原代細胞培養(yǎng)的具體步驟：

1、準備：取各種已消毒的培養(yǎng)用品置于凈化臺面，紫外線消毒20分鐘。開始工作前先洗手、75%酒精擦拭手至肘部。

2、布局：點燃酒精燈，安裝吸管帽。

3、處理組織：把組織塊置于燒杯中，用Hanks液漂洗2-3次，去除血污；如懷疑組織可能污染，可先置于含有青的混合液中30-60分鐘。

5、消化：或用恒溫水浴，或置于37℃溫箱消化均可，消化中每隔20分鐘應搖動一次，如用電磁恒溫攪拌器消化更好。消化時間依組織塊的大小和組織的硬度而定。

6、分離：在消化過程中見消化液發(fā)混濁時，可用吸管吸出少許消化液在鏡下觀察，如組織已分散成細胞團或單個細胞，立即終止消化，隨即通過適宜不銹鋼篩，濾掉尚未充分消化開的組織塊。低速（500-1000轉/分）離心消化液5分鐘，吸出上清，加入適量含有血清的培養(yǎng)液。

7、計數(shù)：用計數(shù)板計數(shù)，如細胞懸液細胞密度過大，再補加培養(yǎng)液調整后，分裝入培養(yǎng)瓶中。對大多數(shù)細胞來說，pH要求在7.2-7.4范圍，培養(yǎng)液呈微紅色，如顏色偏黃，說明液體變酸，可用NaHCO3調整。

8、培養(yǎng)：置于37℃溫箱培養(yǎng)，如用CO2溫箱培養(yǎng)，瓶口需用紗布棉塞或螺旋帽堵塞，紗布塞易生霉菌，每次換液時需要換新塞。

大鼠腦微血管周細胞

商品屬性：

細胞簡介：

大鼠腦微血管周分離自腦微血管；大腦分左右兩個半球，大腦皮質（灰質）覆蓋著每個大腦半球的大部分，它是神經(jīng)元胞體集中的地方。內部則是由神經(jīng)纖維或髓鞘構成的白質。每一個半球都有三個面，即外側面（約占整個皮質面積的1/3）、內側面和底面（占2/3的面積）；半球表面有很多深淺不等的溝或裂，溝或裂之間的隆起叫回，它們大大增加了大腦的表面積；大腦外側面重要的溝、裂有大腦外側裂、頂枕裂和中央溝。由于三溝裂之界隔，使大腦皮質組分為額葉、頂葉、顳葉、枕葉四大部分。周細胞（pericyte）又稱Rouget細胞和壁細胞，是一種包圍全身毛細血管和靜脈中內皮細胞的細胞，可以收縮。周細胞嵌入毛細血管內皮細胞的基膜中，通過物理接觸和旁分泌信號與內皮細胞進行細胞通訊，監(jiān)視和穩(wěn)定內皮細胞的成熟過程。此外，周細胞還具有調控毛細血管血流量、細胞碎屑清除和吞噬以及血腦屏障滲透性的作用，其多功能性是目前研究的熱點之一，所以對血管周細胞的生物學特征、標記物、細胞功能等的研究都為相關研究提供基礎資料。周細胞產(chǎn)生手指狀的外延以調控毛細血管的血流量。周細胞和內皮細胞之間共同擁有一個基膜，基膜上有多種細胞連接，包括多種整合素、神經(jīng)鈣黏素、纖連蛋白以及接合素。它還參與毛細血管直徑的雙向調控；毛細血管受損時，周細胞還可增殖，分化為內皮細胞和成纖維細胞。

方法簡介：

公司實驗室分離的大鼠腦微血管周經(jīng)α-SMA免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

質量檢測：

公司實驗室分離的大鼠腦微血管周采用蛋白酶-膠原酶聯(lián)合消化法制備而來，細胞總量約為5×105cells/瓶。

培養(yǎng)信息：

包被條件 PLL（0.1mg/ml）

培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細胞形態(tài) 成纖維細胞樣

傳代特性 可傳3-5代左右；3代以內狀態(tài)

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

原代細胞VS細胞系：

用酶或機械方法直接從人或動物組織中分離出來的細胞。嚴格來說，從機體分離出來到傳代之前的細胞稱為原代細胞，絕大部分的原代細胞在體外可以分裂10-15次(這與細胞的端粒長短有關)，再加上取材，成本等因素，通常會把培養(yǎng)的第一代到第十代以內的細胞統(tǒng)稱為原代細胞。

原代細胞一般傳至10代左右，大部分細胞衰老死亡，但是有極少數(shù)的細胞能夠度過“危機"而繼續(xù)傳下去，存活的細胞一般能夠傳到40-50代，叫細胞株。當50代以后又會出現(xiàn)“危機"，這時有部分細胞的遺傳物質發(fā)生了改變且?guī)в邪┳兊奶攸c，從而可能無限制地傳代下去，稱為細胞系。

也有認為細胞系指原代細胞培養(yǎng)物經(jīng)傳代成功后所繁殖的細胞群體。也指可長期連續(xù)傳代的培養(yǎng)細胞。由此便引申出了后來的有限細胞系、無限細胞系，因此，細胞系狹義的是指可連續(xù)傳代的細胞，廣義是指可傳代的細胞。而細胞株是通過選擇法或克隆形成法，從原代培養(yǎng)物或細胞系中獲得具有特殊性質或標志物的單一細胞稱為細胞株。

細胞系具有容易培養(yǎng)、種類多、價格便宜、無限傳代等優(yōu)點，也非常容易在培養(yǎng)、凍存中發(fā)生錯誤鑒定及交叉污染的問題。

公司正在銷售的產(chǎn)品：

豬基質金屬蛋白酶9(MMP-9)ELISA 試劑盒 96T/48T

Human collectin (Collectin) ELISA Kit 人膠原凝集素(Collectin)ELISA試劑盒

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CLIAKitforAlpha-SCA(HumanAlpha-sarcomericactin)ELISAKit人α橫紋肌肌動蛋白規(guī)格：48T/96T

血液甲戊二羥酸激酶(mevalonatekinase)活性比色法定量檢測試劑盒20次

Plaphosphatidicacid,PAELISAKit植物凝脂酸(PA)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

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大鼠胱天蛋白酶7(CASP7)ELISA試劑盒 ，英文名： CASP7 ELISA Kit

Rabbit ansforming growth factor beta 2 (TGF beta 2) ELISA Kit 兔轉化生長因子β2(TGFβ2)ELISA試劑盒

(OC43/HKU1)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法) 48T

CLIAKitforMMP-3(HumanMaixmetalloproteinase3)ELISAkit人基質金屬蛋白酶3規(guī)格：48T/96T

體液基質金屬蛋白酶(MMP-14)活性熒光定量檢測試劑盒20次(10樣本)

ELISAKiBP犬醇結合蛋白規(guī)格：48T/96T

CADM3重組大鼠 CADM3 / NECL1 / IGSF4B 蛋白 (Fc 標簽) Protein

CULLIN (Cdc53/CUL 0.5mgCULLIN (Cdc53/CUL)

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ACVR2B Protein Mouse 重組小鼠 ACTRIIB / ACVR2B 蛋白 (His 標簽)

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ANXA6 Protein Human 重組人 Annexin VI / ANXA6 蛋白 (His 標簽)

CADM3重組大鼠 CADM3 / NECL1 / IGSF4B 蛋白 (Fc 標簽) Protein

ACVR2B Protein Mouse 重組小鼠 ACTRIIB / ACVR2B 蛋白 (His 標簽)

NUDT2重組人 NUDT2 / Ap4A hydrolase 蛋白 (His 標簽) Protein