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原代細(xì)胞培養(yǎng)的具體步驟：

1、準(zhǔn)備：取各種已消毒的培養(yǎng)用品置于凈化臺(tái)面，紫外線消毒20分鐘。開(kāi)始工作前先洗手、75%酒精擦拭手至肘部。

2、布局：點(diǎn)燃酒精燈，安裝吸管帽。

3、處理組織：把組織塊置于燒杯中，用Hanks液漂洗2-3次，去除血污；如懷疑組織可能污染，可先置于含有青的混合液中30-60分鐘。

5、消化：或用恒溫水浴，或置于37℃溫箱消化均可，消化中每隔20分鐘應(yīng)搖動(dòng)一次，如用電磁恒溫?cái)嚢杵飨?。消化時(shí)間依組織塊的大小和組織的硬度而定。

6、分離：在消化過(guò)程中見(jiàn)消化液發(fā)混濁時(shí)，可用吸管吸出少許消化液在鏡下觀察，如組織已分散成細(xì)胞團(tuán)或單個(gè)細(xì)胞，立即終止消化，隨即通過(guò)適宜不銹鋼篩，濾掉尚未充分消化開(kāi)的組織塊。低速（500-1000轉(zhuǎn)/分）離心消化液5分鐘，吸出上清，加入適量含有血清的培養(yǎng)液。

7、計(jì)數(shù)：用計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)，如細(xì)胞懸液細(xì)胞密度過(guò)大，再補(bǔ)加培養(yǎng)液調(diào)整后，分裝入培養(yǎng)瓶中。對(duì)大多數(shù)細(xì)胞來(lái)說(shuō)，pH要求在7.2-7.4范圍，培養(yǎng)液呈微紅色，如顏色偏黃，說(shuō)明液體變酸，可用NaHCO3調(diào)整。

8、培養(yǎng)：置于37℃溫箱培養(yǎng)，如用CO2溫箱培養(yǎng)，瓶口需用紗布棉塞或螺旋帽堵塞，紗布塞易生霉菌，每次換液時(shí)需要換新塞。

大鼠胚肺成纖維細(xì)胞

商品屬性：

細(xì)胞簡(jiǎn)介：

大鼠胚肺成纖維分離自胚肺組織；肺是機(jī)體的呼吸器官，位于胸腔，左右各一，覆蓋于心之上。肺有分葉，左二右三，共五葉。肺經(jīng)肺系（指氣管、支氣管等）與喉、鼻相連，故稱喉為肺之門(mén)戶，鼻為肺之外竅。成纖維細(xì)胞（Fibroblast）是疏松結(jié)締組織的主要細(xì)胞成分，由胚胎時(shí)期的間充質(zhì)細(xì)胞分化而來(lái)。成纖維細(xì)胞較大，輪廓清楚，多為突起的紡錘形或星形的扁平狀結(jié)構(gòu)，其細(xì)胞核呈規(guī)則的卵圓形，核仁大而明顯。成纖維細(xì)胞功能活動(dòng)旺盛，細(xì)胞質(zhì)嗜弱堿性，具明顯的蛋白質(zhì)合成和分泌活動(dòng)，在一定條件下，它可以實(shí)現(xiàn)跟纖維細(xì)胞的互相轉(zhuǎn)化；成纖維細(xì)胞對(duì)不同程度的細(xì)胞變性、壞死和組織缺損的修復(fù)有著十分重要的作用。剛分離的胚肺成纖維細(xì)胞呈圓形、折光性良好，懸浮于培養(yǎng)基中。30min細(xì)胞貼壁，其中部分開(kāi)始伸出偽足，表現(xiàn)為小的突起；6h后細(xì)胞基本貼壁，伸展成梭形，胞核清晰，分布較均勻，散在生長(zhǎng)，不聚集成團(tuán)；細(xì)胞生長(zhǎng)迅速，5-7天即呈融合狀態(tài)，細(xì)胞排列緊密，有的交叉重疊生長(zhǎng)，平坦、胞體較大，細(xì)胞質(zhì)透明，細(xì)胞核較大，呈橢圓形，顏色淡。細(xì)胞融合，并彼此連接成網(wǎng)狀；細(xì)胞呈突起的紡錘形或星形的扁平分布。細(xì)胞呈突起的紡錘形或星形的扁平分布。該細(xì)胞在合成和分泌細(xì)胞因子、維持血管內(nèi)外和凝血和纖溶的的動(dòng)態(tài)平衡中起重要作用。

方法簡(jiǎn)介：

公司實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠胚肺成纖維經(jīng)Vimentin免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

質(zhì)量檢測(cè)：

公司實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠胚肺成纖維采用-膠原酶混合消化法結(jié)合差速貼壁法制備而來(lái)，細(xì)胞總量約為5×105cells/瓶。

培養(yǎng)信息：

培養(yǎng)基 含FBS、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長(zhǎng)特性 貼壁

細(xì)胞形態(tài) 成纖維細(xì)胞樣

傳代特性 可傳5代左右；3代以內(nèi)狀態(tài)

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

原代細(xì)胞VS細(xì)胞系：

用酶或機(jī)械方法直接從人或動(dòng)物組織中分離出來(lái)的細(xì)胞。嚴(yán)格來(lái)說(shuō)，從機(jī)體分離出來(lái)到傳代之前的細(xì)胞稱為原代細(xì)胞，絕大部分的原代細(xì)胞在體外可以分裂10-15次(這與細(xì)胞的端粒長(zhǎng)短有關(guān))，再加上取材，成本等因素，通常會(huì)把培養(yǎng)的第一代到第十代以內(nèi)的細(xì)胞統(tǒng)稱為原代細(xì)胞。

原代細(xì)胞一般傳至10代左右，大部分細(xì)胞衰老死亡，但是有極少數(shù)的細(xì)胞能夠度過(guò)“危機(jī)"而繼續(xù)傳下去，存活的細(xì)胞一般能夠傳到40-50代，叫細(xì)胞株。當(dāng)50代以后又會(huì)出現(xiàn)“危機(jī)"，這時(shí)有部分細(xì)胞的遺傳物質(zhì)發(fā)生了改變且?guī)в邪┳兊奶攸c(diǎn)，從而可能無(wú)限制地傳代下去，稱為細(xì)胞系。

也有認(rèn)為細(xì)胞系指原代細(xì)胞培養(yǎng)物經(jīng)傳代成功后所繁殖的細(xì)胞群體。也指可長(zhǎng)期連續(xù)傳代的培養(yǎng)細(xì)胞。由此便引申出了后來(lái)的有限細(xì)胞系、無(wú)限細(xì)胞系，因此，細(xì)胞系狹義的是指可連續(xù)傳代的細(xì)胞，廣義是指可傳代的細(xì)胞。而細(xì)胞株是通過(guò)選擇法或克隆形成法，從原代培養(yǎng)物或細(xì)胞系中獲得具有特殊性質(zhì)或標(biāo)志物的單一細(xì)胞稱為細(xì)胞株。

細(xì)胞系具有容易培養(yǎng)、種類多、價(jià)格便宜、無(wú)限傳代等優(yōu)點(diǎn)，也非常容易在培養(yǎng)、凍存中發(fā)生錯(cuò)誤鑒定及交叉污染的問(wèn)題。

公司正在銷售的產(chǎn)品：

豬可溶性細(xì)胞間粘附分子1(sICAM-1)ELISA 試劑盒 96T/48T

Human procalcitonin (PCT) ELISA Kit 人降鈣素原(PCT)ELISA試劑盒

Porcineai-thrombieceptor,AELISAKit 豬抗受體(A)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

CLIAKitforAMAELISAKit大鼠抗單核細(xì)胞抗體規(guī)格：48T/96T

血液還原型(GSH)濃度高效液相色譜定量檢測(cè)試劑盒50次

PlaVitaminD2,VD2ELISAKit植物D2(VD2)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

豬睪(T)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

豬高鐵血紅蛋白(MHB)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

豬剛地弓形蟲(chóng)(T.gondii)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

豬肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子(HGF)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

大鼠高半胱酸(Hcy)ELISA試劑盒 ，英文名： Hcy ELISA Kit

Rabbit thyroid stimulating hormone (TSH) ELISA Kit 兔子促甲狀腺素(TSH)ELISA試劑盒

人星狀病毒(HastV)核酸檢測(cè)試劑盒(PCR-熒光探針?lè)?span>) 48T

CLIAKitforMF/MPF(Humanmaturationpromotingfactor)ELISAKit人促有絲分裂因子規(guī)格：48T/96T

體液牛病毒性腹瀉病毒II型(BovineViralDiarrhoeaVirus-2;BVDV-2)定量PCR擴(kuò)增檢測(cè)試劑盒20次

ELISAKitB7-2/sCD86?？扇苄园准?xì)胞分化抗原86規(guī)格：48T/96T

PDCD1重組狗 PD1 / PDCD1 / CD279 蛋白 (Fc 標(biāo)簽) Protein

N-cadherin N-鈣粘附分子抗原 0.5mgN-cadherin N-鈣粘附分子抗原

NT5E重組人 CD73 / NT5E 蛋白 (His 標(biāo)簽) Protein

APLP1 Protein Human 重組人 APLP1 / Amyloid-like protein 1 蛋白 (His 標(biāo)簽)

IL17RB Protein Mouse 重組小鼠 IL17BR / IL17RB / IL-17 Receptor B 蛋白 (His 標(biāo)簽)

大鼠胚肺成纖維細(xì)胞N-cadherin N-鈣粘附分子抗原 0.5mgN-cadherin N-鈣粘附分子抗原

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IL17RB Protein Mouse 重組小鼠 IL17BR / IL17RB / IL-17 Receptor B 蛋白 (His 標(biāo)簽)

NT5E重組人 CD73 / NT5E 蛋白 (His 標(biāo)簽) Protein