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本產(chǎn)品僅供科學實驗研究使用! 不能用于臨床或動物診斷！

細胞簡介：

大鼠脾臟單核分離自脾臟組織；脾臟是機體的免疫器官，占全身淋巴組織總量的25%，含有大量的淋巴細胞和巨噬細胞，是機體細胞免疫和體液免疫的中心。位于左季肋區(qū)后外方肋弓深處，與9－11肋相對，長軸與第10肋一致。膈面與膈肌和左肋膈竇相鄰，前方有胃，后方與左腎、左腎上腺毗鄰，下端與結(jié)腸脾溝相鄰，地柔軟的網(wǎng)狀內(nèi)皮細胞器官。單核細胞（monocytes）是體積的白細胞。其細胞核常偏位，呈多形性，如卵圓形、腎形(a)、馬蹄形(b)、不規(guī)則形（c）等，常有折疊感(c)；染色質(zhì)呈疏松網(wǎng)狀，著色較淺。胞質(zhì)較多，嗜堿性，但因含大量細小的嗜天青顆粒而染成灰藍色，顆粒含過氧化物酶。單核細胞是血液中的血細胞。目前認為它是巨噬細胞的前身，具有明顯的變形運動，能吞噬、清除受傷、衰老的細胞及其碎片。單核細胞還參與免疫反應(yīng)，在吞噬抗原后將所攜帶的抗原決定簇轉(zhuǎn)交給淋巴細胞，誘導(dǎo)淋巴細胞的特異性免性反應(yīng)。單核細胞也是對付細胞內(nèi)致病細菌和寄生蟲的主要細胞防衛(wèi)系統(tǒng)，還具有識別和殺傷腫瘤細胞的能力。淋巴細胞則為具有特異性免疫功能的細胞。T淋巴細胞主要參與細胞免疫反應(yīng)而B淋巴細胞參與體液免疫反應(yīng)。

原代細胞培養(yǎng)條件：

?溫度?：通常在37℃下進行，以模擬體內(nèi)溫度。

?pH值?：培養(yǎng)液的pH值應(yīng)保持在7.2~7.4之間，以維持細胞的正常生理狀態(tài)。

?氣體環(huán)境?：在含有5% CO2的培養(yǎng)箱中進行，以促進細胞生長。

?培養(yǎng)基?：使用含有適當營養(yǎng)成分的培養(yǎng)基，如Eagle's MEM、DMEM等。

?無菌操作?：整個培養(yǎng)過程需要在無菌條件下進行，以防止污染。

方法簡介：

實驗室分離的大鼠脾臟單核經(jīng)CD14免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

質(zhì)量檢測：

實驗室分離的大鼠脾臟單核采用密度梯度離心法結(jié)合差速貼壁法制備而來，細胞總量約為5×105cells/瓶。

培養(yǎng)信息：

培養(yǎng)基：含FBS、M-CSF、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率：每2-3天換液一次

生長特性：半貼壁半懸浮

細胞形態(tài)：巨噬細胞樣

傳代特性：不傳代，不增殖，存活1-2周

消化液：0.25%

培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%

原代細胞培養(yǎng)的具體操作步驟如下：

?組織處理?：將動物組織從機體中取出，剪碎后用等消化酶處理，使其分散成單個細胞。

?細胞計數(shù)?：使用血細胞計數(shù)器或其他方法對細胞進行計數(shù)，確保細胞密度適中。

?接種培養(yǎng)?：將細胞懸液接種到培養(yǎng)瓶中，加入適量的培養(yǎng)基，置于37℃、5% CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

?換液和傳代?：定期更換培養(yǎng)液，當細胞達到一定密度時進行傳代培養(yǎng)，以維持細胞的生長狀態(tài)。

原代細胞的4種培養(yǎng)方法：

　　① 組織塊培養(yǎng)法

　　組織塊培養(yǎng)是常用、簡便易行和成功率較高的原代培養(yǎng)方法。其基本方法是將剪成的小組織團塊接種于培養(yǎng)瓶(或皿)中，瓶壁可預(yù)先涂以膠原薄層，以利于組織塊粘著于瓶壁，使周邊細胞能沿瓶壁向外生長。

　　② 消化培養(yǎng)法

　?、?懸浮細胞培養(yǎng)法

　　對于懸浮生長的細胞，如白血病細胞、淋巴細胞、骨髓細胞、胸水和腹水中的癌細胞和免疫細胞無需消化，可采用低速離心分離，直接培養(yǎng)，或經(jīng)淋巴細胞分層液分離后接種培養(yǎng)。

　　④器官培養(yǎng)

　　器官培養(yǎng)是指從供體取得器官或組織塊后，不進行組織分離而直接在體外的特定環(huán)境條件下培養(yǎng)，器官培養(yǎng)可保持器官組織的相對完整性，可用于重點觀察細胞間的聯(lián)系、排列情況和相互影響，以及局部環(huán)境的生物調(diào)節(jié)作用。

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