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原代細胞培養(yǎng)的具體步驟：

1、準備：取各種已消毒的培養(yǎng)用品置于凈化臺面，紫外線消毒20分鐘。開始工作前先洗手、75%酒精擦拭手至肘部。

2、布局：點燃酒精燈，安裝吸管帽。

3、處理組織：把組織塊置于燒杯中，用Hanks液漂洗2-3次，去除血污；如懷疑組織可能污染，可先置于含有青的混合液中30-60分鐘。

5、消化：或用恒溫水浴，或置于37℃溫箱消化均可，消化中每隔20分鐘應(yīng)搖動一次，如用電磁恒溫攪拌器消化更好。消化時間依組織塊的大小和組織的硬度而定。

6、分離：在消化過程中見消化液發(fā)混濁時，可用吸管吸出少許消化液在鏡下觀察，如組織已分散成細胞團或單個細胞，立即終止消化，隨即通過適宜不銹鋼篩，濾掉尚未充分消化開的組織塊。低速（500-1000轉(zhuǎn)/分）離心消化液5分鐘，吸出上清，加入適量含有血清的培養(yǎng)液。

7、計數(shù)：用計數(shù)板計數(shù)，如細胞懸液細胞密度過大，再補加培養(yǎng)液調(diào)整后，分裝入培養(yǎng)瓶中。對大多數(shù)細胞來說，pH要求在7.2-7.4范圍，培養(yǎng)液呈微紅色，如顏色偏黃，說明液體變酸，可用NaHCO3調(diào)整。

8、培養(yǎng)：置于37℃溫箱培養(yǎng)，如用CO2溫箱培養(yǎng)，瓶口需用紗布棉塞或螺旋帽堵塞，紗布塞易生霉菌，每次換液時需要換新塞。

大鼠腎小管上皮細胞

商品屬性：

細胞簡介：

大鼠腎小管上皮分離自腎組織；腎臟是機體的重要器官，它的基本功能是生成尿液，借以清除體內(nèi)代謝產(chǎn)物及某些廢物、毒物，同時經(jīng)重吸收功能保留水份及其他有用物質(zhì)，如葡萄糖、蛋白質(zhì)、氨基酸、鈉離子、鉀離子等，以調(diào)節(jié)水、電解質(zhì)平衡及維護酸堿平衡。腎臟同時還有內(nèi)分泌功能，生成腎素、促紅細胞生成素、活性D3、前列腺素、激肽等，又為機體部分內(nèi)分泌激素的降解場所和腎外激素的靶器官。腎臟的這些功能，保證了機體內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定，使新陳代謝得以正常進行。腎小管是機體腎臟器官上與腎小囊壁層相連的一條細長上皮性小管，具有重吸收（reabsorption）和排泌作用。腎小管按不同的形態(tài)結(jié)構(gòu)、分布位置和功能分成近端小管、髓袢和遠端小管三部分；近端小管可分為直部和曲部，曲部也稱為近曲小管，位于皮質(zhì)迷路內(nèi)，于腎小體附近高度蟠曲；遠端小管曲部也稱為遠曲小管，位于皮質(zhì)迷路內(nèi)。腎小管上皮細胞是腎小管外面的一層細胞，腎小管上皮細胞的分離、培養(yǎng)是研究腎臟疾病的一項重要技術(shù)，目前該細胞分離方法有酶分離法、化學分離法篩網(wǎng)分離法、顯微解剖分離法、流式細胞儀分離法等。腎小管上皮細胞主要功能：①腎小管上皮細胞重吸收原尿中幾乎全部的葡萄糖和氨基酸；②排泌非營養(yǎng)物質(zhì)進入終尿；③細胞能分泌炎癥介質(zhì)如細胞因子和趨化因子，通過產(chǎn)生IL-8或直接趨化白細胞參與急性炎癥反應(yīng)；④移植腎炎癥和新月體腎炎中PTEpiC表達IL-2R和MHC-Ⅱ類抗原，這說明腎小管上皮細胞參與腎免疫損傷的發(fā)生。隨著對腎間質(zhì)纖維化機制研究的日漸加深，腎小管上皮細胞（RTECs）在其中的作用日益被人們重視。因此，提供良好的腎小管上皮細胞模型，在腎小管間質(zhì)疾病的發(fā)病機制和治療藥物篩選的研究中是非常重要的。

方法簡介：

公司實驗室分離的大鼠腎小管上皮經(jīng)Cytokeratin-18免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

質(zhì)量檢測：

公司實驗室分離的大鼠腎小管上皮采用先機械研磨過不銹鋼網(wǎng)篩分離得到腎小管、后用膠原酶消化，結(jié)合上皮細胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來，細胞總量約為5×105cells/瓶。

培養(yǎng)信息：

包被條件 鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2）

培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細胞形態(tài) 上皮細胞樣

傳代特性 可傳1-2代

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

原代細胞VS細胞系：

用酶或機械方法直接從人或動物組織中分離出來的細胞。嚴格來說，從機體分離出來到傳代之前的細胞稱為原代細胞，絕大部分的原代細胞在體外可以分裂10-15次(這與細胞的端粒長短有關(guān))，再加上取材，成本等因素，通常會把培養(yǎng)的第一代到第十代以內(nèi)的細胞統(tǒng)稱為原代細胞。

原代細胞一般傳至10代左右，大部分細胞衰老死亡，但是有極少數(shù)的細胞能夠度過“危機"而繼續(xù)傳下去，存活的細胞一般能夠傳到40-50代，叫細胞株。當50代以后又會出現(xiàn)“危機"，這時有部分細胞的遺傳物質(zhì)發(fā)生了改變且?guī)в邪┳兊奶攸c，從而可能無限制地傳代下去，稱為細胞系。

也有認為細胞系指原代細胞培養(yǎng)物經(jīng)傳代成功后所繁殖的細胞群體。也指可長期連續(xù)傳代的培養(yǎng)細胞。由此便引申出了后來的有限細胞系、無限細胞系，因此，細胞系狹義的是指可連續(xù)傳代的細胞，廣義是指可傳代的細胞。而細胞株是通過選擇法或克隆形成法，從原代培養(yǎng)物或細胞系中獲得具有特殊性質(zhì)或標志物的單一細胞稱為細胞株。

細胞系具有容易培養(yǎng)、種類多、價格便宜、無限傳代等優(yōu)點，也非常容易在培養(yǎng)、凍存中發(fā)生錯誤鑒定及交叉污染的問題。

公司正在銷售的產(chǎn)品：

豬(SS)ELISA 試劑盒 96T/48T

Human somelysin-3 (ST3) ELISA Kit 人基質(zhì)裂解素(ST3)ELISA試劑盒

Guineapigmajorhistocompatibilitycomplex,MHC/GPLAELISAKit 豚鼠主要組織相容性復(fù)合體(MHC/GPLA)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitforANG-2ELISAKit大鼠血管生成素2規(guī)格：48T/96T

血液酶1(PON1)內(nèi)酯酶活性比色法定量檢測試劑盒

PorcineEpithelialgrowthfactor,EGFELISAKit豬表皮生長因子(EGF)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

豬生長激素釋放肽ghrelin(GHRP-Ghrelin)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

豬生長激素釋放多肽(GHRP)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

豬生長激素(GH)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

豬上腺素(EPI)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

大鼠過敏毒素/補體片斷4a(C4a)ELISA試劑盒 ，英文名： C4a ELISA Kit

Rabbit oncostatin M (OSM) ELISA Kit 兔抑瘤素M(OSM)ELISA試劑盒

甲型流感病毒(IAV)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法) 48T

CLIAKitforMMP-9/GelatinaseBELISAKit大鼠基質(zhì)金屬蛋白酶9/明膠酶B規(guī)格：48T/96T

體液基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP-1)活性比色法定量檢測試劑盒20次

ELISAKitTpP犬血栓前體蛋白規(guī)格：48T/96T

IFNA1重組大鼠 IFN-alpha / IFNA1 / IFN 蛋白 (Fc 標簽) Protein

H1N1(Influenza A virus ,hemagglutinin 0.5mgH1N1(Influenza A virus ,hemagglutinin) 流感病毒A抗原

IGJ重組人 IGJ / Immunoglobulin J chain 蛋白 (His 標簽) Protein

B3GNT2 Protein Human 重組人 B3GNT2 蛋白 (Fc 標簽)

TCN2 Protein Mouse 重組小鼠 TCN2 / Transcobalamin-II 蛋白 (His 標簽)

大鼠腎小管上皮細胞H1N1(Influenza A virus ,hemagglutinin 0.5mgH1N1(Influenza A virus ,hemagglutinin) 流感病毒A抗原

B3GNT2 Protein Human 重組人 B3GNT2 蛋白 (Fc 標簽)

IFNA1重組大鼠 IFN-alpha / IFNA1 / IFN 蛋白 (Fc 標簽) Protein

TCN2 Protein Mouse 重組小鼠 TCN2 / Transcobalamin-II 蛋白 (His 標簽)

IGJ重組人 IGJ / Immunoglobulin J chain 蛋白 (His 標簽) Protein