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原代細(xì)胞培養(yǎng)的具體步驟：

1、準(zhǔn)備：取各種已消毒的培養(yǎng)用品置于凈化臺(tái)面，紫外線消毒20分鐘。開(kāi)始工作前先洗手、75%酒精擦拭手至肘部。

2、布局：點(diǎn)燃酒精燈，安裝吸管帽。

3、處理組織：把組織塊置于燒杯中，用Hanks液漂洗2-3次，去除血污；如懷疑組織可能污染，可先置于含有青的混合液中30-60分鐘。

5、消化：或用恒溫水浴，或置于37℃溫箱消化均可，消化中每隔20分鐘應(yīng)搖動(dòng)一次，如用電磁恒溫?cái)嚢杵飨?。消化時(shí)間依組織塊的大小和組織的硬度而定。

6、分離：在消化過(guò)程中見(jiàn)消化液發(fā)混濁時(shí)，可用吸管吸出少許消化液在鏡下觀察，如組織已分散成細(xì)胞團(tuán)或單個(gè)細(xì)胞，立即終止消化，隨即通過(guò)適宜不銹鋼篩，濾掉尚未充分消化開(kāi)的組織塊。低速（500-1000轉(zhuǎn)/分）離心消化液5分鐘，吸出上清，加入適量含有血清的培養(yǎng)液。

7、計(jì)數(shù)：用計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)，如細(xì)胞懸液細(xì)胞密度過(guò)大，再補(bǔ)加培養(yǎng)液調(diào)整后，分裝入培養(yǎng)瓶中。對(duì)大多數(shù)細(xì)胞來(lái)說(shuō)，pH要求在7.2-7.4范圍，培養(yǎng)液呈微紅色，如顏色偏黃，說(shuō)明液體變酸，可用NaHCO3調(diào)整。

8、培養(yǎng)：置于37℃溫箱培養(yǎng)，如用CO2溫箱培養(yǎng)，瓶口需用紗布棉塞或螺旋帽堵塞，紗布塞易生霉菌，每次換液時(shí)需要換新塞。

大鼠食管平滑肌細(xì)胞

商品屬性：

細(xì)胞簡(jiǎn)介：

大鼠食管平滑肌分離自食管組織；食管可分為頸段、胸段和腹段，脊椎動(dòng)物食管的頸段位于氣管背后和脊柱前端，胸段位于左、右肺之間的縱膈內(nèi)，胸段通過(guò)膈孔與腹腔內(nèi)腹相連，腹段很短與胃相連。哺乳動(dòng)物的食管結(jié)構(gòu)上由內(nèi)向外分四層：黏膜層、黏膜下層、肌層和外膜。其中，肌層上1/3段為骨骼肌，下1/3為平滑肌，中段為骨骼肌和平滑肌混合組成。其中，肌纖維的排列方式分為內(nèi)環(huán)形和外縱形兩層。食管的蠕動(dòng)是由食管平滑肌收縮嚴(yán)格控制，食管還有括約肌，位于環(huán)狀軟骨水平的，稱為食管上括約??；位于食管下端，一部分在膈上，穿過(guò)膈孔，另一部分在膈下的高壓帶，稱為食管下括約肌。食管平滑肌細(xì)胞原代分離培養(yǎng)3天后，可見(jiàn)細(xì)胞貼壁伸展，細(xì)胞形態(tài)大小不一，呈梭形、不規(guī)則形、三角形或扇形，核卵圓形、居中；2周后細(xì)胞匯合，多數(shù)細(xì)胞伸展呈長(zhǎng)梭形，胞漿豐富，有分枝狀突起，細(xì)胞平行排列成單層或部分區(qū)域多層重疊生長(zhǎng)，高低起伏；細(xì)胞密度低時(shí)，常交織成網(wǎng)狀；密度高時(shí)，則排列為旋渦狀或柵欄狀。傳代后細(xì)胞生長(zhǎng)較快，4-6天即可匯合，并保持上述形態(tài)學(xué)特征和生長(zhǎng)特點(diǎn)。

方法簡(jiǎn)介：

公司實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠食管平滑肌經(jīng)α-SMA免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

質(zhì)量檢測(cè)：

公司實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠食管平滑肌采用-膠原酶聯(lián)合消化法結(jié)合差速貼壁法制備而來(lái)，細(xì)胞總量約為5×105cells/瓶。

培養(yǎng)信息：

培養(yǎng)基 含FBS、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長(zhǎng)特性 貼壁

細(xì)胞形態(tài) 成纖維細(xì)胞樣

傳代特性 可傳5代左右；3代以內(nèi)狀態(tài)

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

原代細(xì)胞VS細(xì)胞系：

用酶或機(jī)械方法直接從人或動(dòng)物組織中分離出來(lái)的細(xì)胞。嚴(yán)格來(lái)說(shuō)，從機(jī)體分離出來(lái)到傳代之前的細(xì)胞稱為原代細(xì)胞，絕大部分的原代細(xì)胞在體外可以分裂10-15次(這與細(xì)胞的端粒長(zhǎng)短有關(guān))，再加上取材，成本等因素，通常會(huì)把培養(yǎng)的第一代到第十代以內(nèi)的細(xì)胞統(tǒng)稱為原代細(xì)胞。

原代細(xì)胞一般傳至10代左右，大部分細(xì)胞衰老死亡，但是有極少數(shù)的細(xì)胞能夠度過(guò)“危機(jī)"而繼續(xù)傳下去，存活的細(xì)胞一般能夠傳到40-50代，叫細(xì)胞株。當(dāng)50代以后又會(huì)出現(xiàn)“危機(jī)"，這時(shí)有部分細(xì)胞的遺傳物質(zhì)發(fā)生了改變且?guī)в邪┳兊奶攸c(diǎn)，從而可能無(wú)限制地傳代下去，稱為細(xì)胞系。

也有認(rèn)為細(xì)胞系指原代細(xì)胞培養(yǎng)物經(jīng)傳代成功后所繁殖的細(xì)胞群體。也指可長(zhǎng)期連續(xù)傳代的培養(yǎng)細(xì)胞。由此便引申出了后來(lái)的有限細(xì)胞系、無(wú)限細(xì)胞系，因此，細(xì)胞系狹義的是指可連續(xù)傳代的細(xì)胞，廣義是指可傳代的細(xì)胞。而細(xì)胞株是通過(guò)選擇法或克隆形成法，從原代培養(yǎng)物或細(xì)胞系中獲得具有特殊性質(zhì)或標(biāo)志物的單一細(xì)胞稱為細(xì)胞株。

細(xì)胞系具有容易培養(yǎng)、種類多、價(jià)格便宜、無(wú)限傳代等優(yōu)點(diǎn)，也非常容易在培養(yǎng)、凍存中發(fā)生錯(cuò)誤鑒定及交叉污染的問(wèn)題。

公司正在銷售的產(chǎn)品：

豬髓過(guò)氧化物酶(MPO)ELISA 試劑盒 96T/48T

Human tissue inhibitors of metalloproteinase 4 (TIMP-4) ELISA Kit 人基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子4(TIMP-4)ELISA試劑盒

GuineaPigcalcitoningenerelatedpeptide,CGRPELISAKit 豚鼠降鈣素基因相關(guān)肽(CGRP)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

CLIAKitforANGA(Humanai-neuophilgranulesaibody)ELISAKit人抗粒細(xì)胞顆?？贵w規(guī)格：48T/96T

血液丁酰酯酶活性比色法定量檢測(cè)試劑盒20次

PorcineFibrinogenDegradationProduct,FDPELISAKit豬血纖蛋白原降解產(chǎn)物(FDP)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

豬透明質(zhì)酸elisa試劑盒   豬透明質(zhì)酸試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   豬透明質(zhì)酸試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來(lái)源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：豬透明質(zhì)酸試劑盒、豬透明質(zhì)酸elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。

豬C反應(yīng)蛋白elisa試劑盒   豬C反應(yīng)蛋白試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   豬C反應(yīng)蛋白試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來(lái)源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：豬C反應(yīng)蛋白試劑盒、豬C反應(yīng)蛋白elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。

雞細(xì)胞凋亡抑制因子elisa試劑盒   雞細(xì)胞凋亡抑制因子試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   雞細(xì)胞凋亡抑制因子試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來(lái)源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：雞細(xì)胞凋亡抑制因子試劑盒、雞細(xì)胞凋亡抑制因子elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。

雞狀腺原酸elisa試劑盒   雞狀腺原酸試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   雞狀腺原酸試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來(lái)源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：雞狀腺原酸試劑盒、雞狀腺原酸elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。

大鼠Syndecan-1/CD138(SDC1)ELISA試劑盒 ，英文名： SDC1 ELISA Kit

Rabbit neuron specific enolase (NSE) ELISA Kit 兔子神經(jīng)特異性烯醇化酶(NSE)ELISA試劑盒

ELISA 小鼠P物質(zhì)(mouse Substance P) 48T/96T 進(jìn)口分裝

CLIAKitforIFN-Omega(HumanIerferonOmega,IFN-Omega)ELISAKit人ω干擾素規(guī)格：48T/96T

通用型禽鼻氣管炎和腫頭綜合征(T)試劑盒20次

ELISAKitVE大鼠E規(guī)格：48T/96T

SPN重組大鼠 SPN / CD43 / Sialophorin 蛋白 (Fc 標(biāo)簽) Protein

Cyr61/IGFBP10/CCN1(cysteine rich 61 0.5mgCyr61/IGFBP10/CCN1(cysteine rich 61) 富半胱肝素結(jié)合蛋白61抗原

IGSF3重組人 IGSF3 / EWI-3 蛋白 (His 標(biāo)簽) Protein

BCAM Protein Human 重組人 BCAM 蛋白 (His 標(biāo)簽)

AXL Protein Mouse 重組小鼠 Axl Kinase 蛋白 (His 標(biāo)簽)

大鼠食管平滑肌細(xì)胞Cyr61/IGFBP10/CCN1(cysteine rich 61 0.5mgCyr61/IGFBP10/CCN1(cysteine rich 61) 富半胱肝素結(jié)合蛋白61抗原

BCAM Protein Human 重組人 BCAM 蛋白 (His 標(biāo)簽)

SPN重組大鼠 SPN / CD43 / Sialophorin 蛋白 (Fc 標(biāo)簽) Protein

AXL Protein Mouse 重組小鼠 Axl Kinase 蛋白 (His 標(biāo)簽)

IGSF3重組人 IGSF3 / EWI-3 蛋白 (His 標(biāo)簽) Protein