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大鼠眼動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞

商品屬性：

細(xì)胞簡(jiǎn)介：

大鼠眼動(dòng)脈內(nèi)皮分離自眼動(dòng)脈組織，眼動(dòng)脈是眼眶及內(nèi)容物主要的血液供應(yīng)，是頸內(nèi)動(dòng)脈主要分枝，也是交通顱內(nèi)外血管的重要通道。有研究結(jié)果認(rèn)為，絕大多數(shù)眼動(dòng)脈起源于ICA剛出海綿竇處，且多數(shù)起源于ICA床突上段內(nèi)上壁，少數(shù)起源于上壁，少數(shù)眼動(dòng)脈可起源于ICA海綿竇段及腦膜中動(dòng)脈。眼動(dòng)脈的走行分為顱內(nèi)段、管內(nèi)段及眶內(nèi)段，眼動(dòng)脈在管內(nèi)段一般行走于視神經(jīng)上方，顱內(nèi)段和眶內(nèi)段再分為五段：1、短臂；2、A角；3、長(zhǎng)臂；4、B角；5、遠(yuǎn)側(cè)部。眼動(dòng)脈進(jìn)入眶內(nèi)后沿視神經(jīng)向下外側(cè)走行，終止于眶孔的上內(nèi)側(cè)角。眼動(dòng)脈的分枝一般分為眼組、眶組及眶外組。眼組分為視網(wǎng)膜中央動(dòng)脈睫前動(dòng)脈及眼球的脈絡(luò)叢；眶組分為淚腺動(dòng)脈和肌動(dòng)脈；眶外組分為篩后動(dòng)脈、篩前動(dòng)脈、眶上動(dòng)脈、瞼內(nèi)側(cè)動(dòng)脈、鼻背動(dòng)脈(終末枝)。眼動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞是覆蓋在眼動(dòng)脈內(nèi)面的單層細(xì)胞，可分泌一系列血管活性物質(zhì)而保持血管穩(wěn)態(tài)，當(dāng)其受到炎癥或其它因素刺激后穩(wěn)態(tài)被破壞而導(dǎo)致一些血管疾病的發(fā)生。因此，眼動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞已成為研究眼部血管疾病發(fā)病機(jī)制及治療藥物的工具。內(nèi)皮細(xì)胞或血管內(nèi)皮是一薄層的專(zhuān)門(mén)上皮細(xì)胞，由一層扁平細(xì)胞所組成。它形成血管的內(nèi)壁，是血管管腔內(nèi)血液及其他血管壁（單層鱗狀上皮）的接口。內(nèi)皮細(xì)胞是沿著整個(gè)循環(huán)系統(tǒng)，由心臟直至小的微血管。眼動(dòng)脈供應(yīng)整個(gè)眼球、眼球附屬器及部分附近組織的營(yíng)養(yǎng)。眼動(dòng)脈可發(fā)生痙攣、血栓、栓塞及出血等，均可嚴(yán)重影響視力。頸內(nèi)動(dòng)脈眼動(dòng)脈瘤簡(jiǎn)稱(chēng)眼動(dòng)脈瘤，又稱(chēng)床突旁動(dòng)脈瘤或頸內(nèi)動(dòng)脈腹側(cè)動(dòng)脈瘤。眼動(dòng)脈瘤是位于眼動(dòng)脈和后交通動(dòng)脈之間的動(dòng)脈瘤，占全部顱內(nèi)動(dòng)脈瘤的0.47%～9.26%，30%～70%患者表現(xiàn)為SAH，1/3有視功能損傷，如視力減退、視野缺損和視神經(jīng)等。體外培養(yǎng)的眼動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞對(duì)于研究其生理功能、藥物作用以及各種致病因素作用下的病理生理改變具重要意義。

方法簡(jiǎn)介：

實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠眼動(dòng)脈內(nèi)皮經(jīng)CD31免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

質(zhì)量檢測(cè)：

實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠眼動(dòng)脈內(nèi)皮采用-膠原酶聯(lián)合消化法結(jié)合差速貼壁法、并通過(guò)內(nèi)皮細(xì)胞專(zhuān)用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來(lái)，細(xì)胞總量約為5×105cells/瓶。

培養(yǎng)信息：

包被條件：PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%）

培養(yǎng)基：基礎(chǔ)培養(yǎng)基，含FBS、EGF、bFGF、IGF、VEGF、Heparin、Hydrocortisone、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率：每2-3天換液一次

生長(zhǎng)特性：貼壁

細(xì)胞形態(tài)：內(nèi)皮細(xì)胞樣

傳代特性：可傳2-3代

消化液：0.25%

培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%

原代細(xì)胞VS細(xì)胞系：

用酶或機(jī)械方法直接從人或動(dòng)物組織中分離出來(lái)的細(xì)胞。嚴(yán)格來(lái)說(shuō)，從機(jī)體分離出來(lái)到傳代之前的細(xì)胞稱(chēng)為原代細(xì)胞，絕大部分的原代細(xì)胞在體外可以分裂10-15次(這與細(xì)胞的端粒長(zhǎng)短有關(guān))，再加上取材，成本等因素，通常會(huì)把培養(yǎng)的第一代到第十代以?xún)?nèi)的細(xì)胞統(tǒng)稱(chēng)為原代細(xì)胞。

原代細(xì)胞一般傳至10代左右，大部分細(xì)胞衰老死亡，但是有極少數(shù)的細(xì)胞能夠度過(guò)“危機(jī)"而繼續(xù)傳下去，存活的細(xì)胞一般能夠傳到40-50代，叫細(xì)胞株。當(dāng)50代以后又會(huì)出現(xiàn)“危機(jī)"，這時(shí)有部分細(xì)胞的遺傳物質(zhì)發(fā)生了改變且?guī)в邪┳兊奶攸c(diǎn)，從而可能無(wú)限制地傳代下去，稱(chēng)為細(xì)胞系。

也有認(rèn)為細(xì)胞系指原代細(xì)胞培養(yǎng)物經(jīng)傳代成功后所繁殖的細(xì)胞群體。也指可長(zhǎng)期連續(xù)傳代的培養(yǎng)細(xì)胞。由此便引申出了后來(lái)的有限細(xì)胞系、無(wú)限細(xì)胞系，因此，細(xì)胞系狹義的是指可連續(xù)傳代的細(xì)胞，廣義是指可傳代的細(xì)胞。而細(xì)胞株是通過(guò)選擇法或克隆形成法，從原代培養(yǎng)物或細(xì)胞系中獲得具有特殊性質(zhì)或標(biāo)志物的單一細(xì)胞稱(chēng)為細(xì)胞株。

細(xì)胞系具有容易培養(yǎng)、種類(lèi)多、價(jià)格便宜、無(wú)限傳代等優(yōu)點(diǎn)，也非常容易在培養(yǎng)、凍存中發(fā)生錯(cuò)誤鑒定及交叉污染的問(wèn)題。

原代細(xì)胞培養(yǎng)的具體步驟：

1、準(zhǔn)備：取各種已消毒的培養(yǎng)用品置于凈化臺(tái)面，紫外線(xiàn)消毒20分鐘。開(kāi)始工作前先洗手、75%酒精擦拭手至肘部。

2、布局：點(diǎn)燃酒精燈，安裝吸管帽。

3、處理組織：把組織塊置于燒杯中，用Hanks液漂洗2-3次，去除血污；如懷疑組織可能污染，可先置于含有青的混合液中30-60分鐘。

5、消化：或用恒溫水浴，或置于37℃溫箱消化均可，消化中每隔20分鐘應(yīng)搖動(dòng)一次，如用電磁恒溫?cái)嚢杵飨谩Ｏ瘯r(shí)間依組織塊的大小和組織的硬度而定。

6、分離：在消化過(guò)程中見(jiàn)消化液發(fā)混濁時(shí)，可用吸管吸出少許消化液在鏡下觀察，如組織已分散成細(xì)胞團(tuán)或單個(gè)細(xì)胞，立即終止消化，隨即通過(guò)適宜不銹鋼篩，濾掉尚未充分消化開(kāi)的組織塊。低速（500-1000轉(zhuǎn)/分）離心消化液5分鐘，吸出上清，加入適量含有血清的培養(yǎng)液。

7、計(jì)數(shù)：用計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)，如細(xì)胞懸液細(xì)胞密度過(guò)大，再補(bǔ)加培養(yǎng)液調(diào)整后，分裝入培養(yǎng)瓶中。對(duì)大多數(shù)細(xì)胞來(lái)說(shuō)，pH要求在7.2-7.4范圍，培養(yǎng)液呈微紅色，如顏色偏黃，說(shuō)明液體變酸，可用NaHCO3調(diào)整。

8、培養(yǎng)：置于37℃溫箱培養(yǎng)，如用CO2溫箱培養(yǎng)，瓶口需用紗布棉塞或螺旋帽堵塞，紗布塞易生霉菌，每次換液時(shí)需要換新塞。

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