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原代細(xì)胞培養(yǎng)的具體步驟：

1、準(zhǔn)備：取各種已消毒的培養(yǎng)用品置于凈化臺面，紫外線消毒20分鐘。開始工作前先洗手、75%酒精擦拭手至肘部。

2、布局：點(diǎn)燃酒精燈，安裝吸管帽。

3、處理組織：把組織塊置于燒杯中，用Hanks液漂洗2-3次，去除血污；如懷疑組織可能污染，可先置于含有青的混合液中30-60分鐘。

5、消化：或用恒溫水浴，或置于37℃溫箱消化均可，消化中每隔20分鐘應(yīng)搖動一次，如用電磁恒溫攪拌器消化更好。消化時間依組織塊的大小和組織的硬度而定。

6、分離：在消化過程中見消化液發(fā)混濁時，可用吸管吸出少許消化液在鏡下觀察，如組織已分散成細(xì)胞團(tuán)或單個細(xì)胞，立即終止消化，隨即通過適宜不銹鋼篩，濾掉尚未充分消化開的組織塊。低速（500-1000轉(zhuǎn)/分）離心消化液5分鐘，吸出上清，加入適量含有血清的培養(yǎng)液。

7、計數(shù)：用計數(shù)板計數(shù)，如細(xì)胞懸液細(xì)胞密度過大，再補(bǔ)加培養(yǎng)液調(diào)整后，分裝入培養(yǎng)瓶中。對大多數(shù)細(xì)胞來說，pH要求在7.2-7.4范圍，培養(yǎng)液呈微紅色，如顏色偏黃，說明液體變酸，可用NaHCO3調(diào)整。

8、培養(yǎng)：置于37℃溫箱培養(yǎng)，如用CO2溫箱培養(yǎng)，瓶口需用紗布棉塞或螺旋帽堵塞，紗布塞易生霉菌，每次換液時需要換新塞。

大鼠羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞

商品屬性：

細(xì)胞簡介：

大鼠羊膜間充質(zhì)干分離自胎盤羊膜組織；胎盤（placenta）是哺乳動物妊娠期間由胚胎的胚膜和母體子宮內(nèi)膜聯(lián)合長成的母子間交換物質(zhì)的過渡性器官，由羊膜、葉狀絨毛膜和底蛻膜構(gòu)成。胎兒在子宮中發(fā)育，依靠胎盤從母體取得營養(yǎng)，而雙方保持相當(dāng)?shù)莫?dú)立性。胎盤還產(chǎn)生多種維持妊娠的激素，是一個重要的內(nèi)分泌器官。有些爬行類和魚類也以胎生方式繁殖后代，胚胎生長出一些輔助結(jié)構(gòu)如卵黃囊、鰓絲等與母體組織緊密結(jié)合，以達(dá)到母子間物質(zhì)的交換，這樣的結(jié)構(gòu)稱假胎盤。羊膜是胎盤的內(nèi)層，與眼結(jié)膜組織結(jié)構(gòu)相似，含有眼表上皮細(xì)胞，包括結(jié)膜細(xì)胞和角膜上皮細(xì)胞生長所需要的物質(zhì)，其光滑，無血管、神經(jīng)及淋巴，具有一定的彈性；在電鏡下，其分為五層：上皮層、基底膜、致密層、纖維母細(xì)胞層和海綿層，羊膜基底膜和羊膜羊膜基質(zhì)層含有大量不同的膠元，主要為Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅶ型膠原和纖維粘連蛋白、層粘連蛋白等成份。羊膜細(xì)胞主要由羊膜上皮細(xì)胞和羊膜間充質(zhì)細(xì)胞組成，均具有多分化潛能，可轉(zhuǎn)化為神經(jīng)元，且還有合成、釋放生物活性物質(zhì)和神經(jīng)營養(yǎng)因子的功能。

方法簡介：

實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠羊膜間充質(zhì)干經(jīng)CD44免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

質(zhì)量檢測：

實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠羊膜間充質(zhì)干采用-膠原酶混合酶消化后差速貼壁制備而來，細(xì)胞總量約為5×105cells/瓶。

培養(yǎng)信息：

培養(yǎng)基：含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率：每2-3天換液一次

生長特性：貼壁

細(xì)胞形態(tài)：成纖維細(xì)胞樣

傳代特性：可傳3代左右

消化液：0.25%

培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%

原代細(xì)胞VS細(xì)胞系：

用酶或機(jī)械方法直接從人或動物組織中分離出來的細(xì)胞。嚴(yán)格來說，從機(jī)體分離出來到傳代之前的細(xì)胞稱為原代細(xì)胞，絕大部分的原代細(xì)胞在體外可以分裂10-15次(這與細(xì)胞的端粒長短有關(guān))，再加上取材，成本等因素，通常會把培養(yǎng)的第一代到第十代以內(nèi)的細(xì)胞統(tǒng)稱為原代細(xì)胞。

原代細(xì)胞一般傳至10代左右，大部分細(xì)胞衰老死亡，但是有極少數(shù)的細(xì)胞能夠度過“危機(jī)"而繼續(xù)傳下去，存活的細(xì)胞一般能夠傳到40-50代，叫細(xì)胞株。當(dāng)50代以后又會出現(xiàn)“危機(jī)"，這時有部分細(xì)胞的遺傳物質(zhì)發(fā)生了改變且?guī)в邪┳兊奶攸c(diǎn)，從而可能無限制地傳代下去，稱為細(xì)胞系。

也有認(rèn)為細(xì)胞系指原代細(xì)胞培養(yǎng)物經(jīng)傳代成功后所繁殖的細(xì)胞群體。也指可長期連續(xù)傳代的培養(yǎng)細(xì)胞。由此便引申出了后來的有限細(xì)胞系、無限細(xì)胞系，因此，細(xì)胞系狹義的是指可連續(xù)傳代的細(xì)胞，廣義是指可傳代的細(xì)胞。而細(xì)胞株是通過選擇法或克隆形成法，從原代培養(yǎng)物或細(xì)胞系中獲得具有特殊性質(zhì)或標(biāo)志物的單一細(xì)胞稱為細(xì)胞株。

細(xì)胞系具有容易培養(yǎng)、種類多、價格便宜、無限傳代等優(yōu)點(diǎn)，也非常容易在培養(yǎng)、凍存中發(fā)生錯誤鑒定及交叉污染的問題。

公司正在銷售的產(chǎn)品：

小鼠(AZT)ELISA 試劑盒 96T/48T

Human acid sphingomyelinase (ASM) ELISA Kit 人酸性神經(jīng)鞘0脂酶(ASM)ELISA試劑盒

Humanplateletfactor3,PF3ELISAKit 人血小板因子3(PF-3)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

Humanarachidonate5-lipoxygenase,ALOX-5ELISA試劑盒人花生四烯酸5脂加氧酶(ALOX-5)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

植物游離吲哚-3-乙酸(IAA)比色法定量檢測試劑盒(包括萃取)20次

HumahyroidStimulatingHormone，TSHELISAKit人促甲狀腺素(TSH)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

細(xì)胞毒 T 淋巴細(xì)胞相關(guān)抗原 4(CTLA-4)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進(jìn)口分裝

結(jié)締組織生長因子 (CTGF)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進(jìn)口分裝

心肌營養(yǎng)素 -1(CT-1)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進(jìn)口分裝

心肌鈣蛋白 I(cTnI)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進(jìn)口分裝

大鼠酸性成纖維細(xì)胞生長因子(FGF1)ELISA試劑盒 ，英文名： FGF1 ELISA Kit

Mouse ferritin (FE) ELISA Kit 小鼠鐵蛋白(FE)ELISA試劑盒

ratEndothelin1,ET-1ELISAKit 大鼠內(nèi)皮素1(ET-1)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

CLIAKitforhiston-H2bELISAKit大鼠組蛋白H2b規(guī)格：48T/96T

細(xì)胞ROCK-I激酶活性定量檢測試劑盒(A/B/C)20次

ELISAKitPⅢNP大鼠Ⅲ型前膠原肽規(guī)格：48T/96T

EFNA2重組小鼠 Ephrin-A2 / EFNA2 蛋白 (His 標(biāo)簽) Protein

Apo-E (Apolipoprotein E 0.5mgApo-E (Apolipoprotein E) 載脂蛋白E(抗原)

CXCL12重組人 CXCL12 / SDF-1 蛋白 (isoform a) Protein

FCGRT & B2M Protein Human 重組人 FCGRT & B2M Heterodimer 蛋白

REG3A Protein Rat 重組大鼠 REG3A 蛋白 (His 標(biāo)簽)

大鼠羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞Apo-E (Apolipoprotein E 0.5mgApo-E (Apolipoprotein E) 載脂蛋白E(抗原)

FCGRT & B2M Protein Human 重組人 FCGRT & B2M Heterodimer 蛋白

EFNA2重組小鼠 Ephrin-A2 / EFNA2 蛋白 (His 標(biāo)簽) Protein

REG3A Protein Rat 重組大鼠 REG3A 蛋白 (His 標(biāo)簽)

CXCL12重組人 CXCL12 / SDF-1 蛋白 (isoform a) Protein