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本產(chǎn)品僅供科學實驗研究使用! 不能用于臨床或動物診斷！

細胞簡介：

兔肺微血管平滑肌分離自肺組織；肺是機體的呼吸器官，位于胸腔，左右各一，覆蓋于心之上。肺有分葉，左二右三，共五葉。肺經(jīng)肺系（指氣管、支氣管等）與喉、鼻相連，故稱喉為肺之門戶，鼻為肺之外竅。肺血管平滑肌細胞原代分離培養(yǎng)3天后，可見細胞貼壁伸展，細胞形態(tài)大小不一，呈梭形、不規(guī)則形、三角形或扇形，核卵圓形、居中；2周后細胞匯合，多數(shù)細胞伸展呈長梭形，胞漿豐富，有分枝狀突起，細胞平行排列成單層或部分區(qū)域多層重疊生長，高低起伏；細胞密度低時，常交織成網(wǎng)狀；密度高時，則排列為旋渦狀或柵欄狀。傳代后細胞生長較快，4-6天即可匯合，并保持上述形態(tài)學特征和生長特點。肺血管平滑肌細胞主要功能：①細胞表面表達介質(zhì)（ICAM-1和VCAM-1）參與血管壁炎癥反應；②是多數(shù)重要動脈疾病的靶細胞。肺血管平滑肌細胞與主要病生理變化：①平滑肌增生易致肺動脈高壓；②先天性肺動脈狹窄；③肺動脈栓塞。血管平滑肌細胞的加速生長潛能是血管疾病進展的關(guān)鍵因素，新研究表明血管平滑肌細胞表達的ICAM-1和VCAM-1能促進血管壁的炎癥反應，并且與血管疾病的發(fā)展及穩(wěn)定性有關(guān)。

原代細胞培養(yǎng)條件：

?溫度?：通常在37℃下進行，以模擬體內(nèi)溫度。

?pH值?：培養(yǎng)液的pH值應保持在7.2~7.4之間，以維持細胞的正常生理狀態(tài)。

?氣體環(huán)境?：在含有5% CO2的培養(yǎng)箱中進行，以促進細胞生長。

?培養(yǎng)基?：使用含有適當營養(yǎng)成分的培養(yǎng)基，如Eagle's MEM、DMEM等。

?無菌操作?：整個培養(yǎng)過程需要在無菌條件下進行，以防止污染。

方法簡介：

實驗室分離的兔肺微血管平滑肌經(jīng)α-SMA免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

質(zhì)量檢測：

實驗室分離的兔肺微血管平滑肌采用混合膠原酶消化法制備而來，細胞總量約為5×105cells/瓶。

培養(yǎng)信息：

培養(yǎng)基：含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率：每2-3天換液一次

生長特性：貼壁

細胞形態(tài)：成纖維細胞樣

傳代特性：可傳3代左右

消化液：0.25%

培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%

原代細胞培養(yǎng)的具體操作步驟如下：

?組織處理?：將動物組織從機體中取出，剪碎后用等消化酶處理，使其分散成單個細胞。

?細胞計數(shù)?：使用血細胞計數(shù)器或其他方法對細胞進行計數(shù)，確保細胞密度適中。

?接種培養(yǎng)?：將細胞懸液接種到培養(yǎng)瓶中，加入適量的培養(yǎng)基，置于37℃、5% CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

?換液和傳代?：定期更換培養(yǎng)液，當細胞達到一定密度時進行傳代培養(yǎng)，以維持細胞的生長狀態(tài)。

原代細胞的4種培養(yǎng)方法：

　　① 組織塊培養(yǎng)法

　　組織塊培養(yǎng)是常用、簡便易行和成功率較高的原代培養(yǎng)方法。其基本方法是將剪成的小組織團塊接種于培養(yǎng)瓶(或皿)中，瓶壁可預先涂以膠原薄層，以利于組織塊粘著于瓶壁，使周邊細胞能沿瓶壁向外生長。

　　② 消化培養(yǎng)法

　?、?懸浮細胞培養(yǎng)法

　　對于懸浮生長的細胞，如白血病細胞、淋巴細胞、骨髓細胞、胸水和腹水中的癌細胞和免疫細胞無需消化，可采用低速離心分離，直接培養(yǎng)，或經(jīng)淋巴細胞分層液分離后接種培養(yǎng)。

　?、芷鞴倥囵B(yǎng)

　　器官培養(yǎng)是指從供體取得器官或組織塊后，不進行組織分離而直接在體外的特定環(huán)境條件下培養(yǎng)，器官培養(yǎng)可保持器官組織的相對完整性，可用于重點觀察細胞間的聯(lián)系、排列情況和相互影響，以及局部環(huán)境的生物調(diào)節(jié)作用。

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