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原代細(xì)胞VS細(xì)胞系：

用酶或機(jī)械方法直接從人或動(dòng)物組織中分離出來的細(xì)胞。嚴(yán)格來說，從機(jī)體分離出來到傳代之前的細(xì)胞稱為原代細(xì)胞，絕大部分的原代細(xì)胞在體外可以分裂10-15次(這與細(xì)胞的端粒長(zhǎng)短有關(guān))，再加上取材，成本等因素，通常會(huì)把培養(yǎng)的第一代到第十代以內(nèi)的細(xì)胞統(tǒng)稱為原代細(xì)胞。

?小鼠心肌細(xì)胞

商品屬性：

細(xì)胞簡(jiǎn)介：

小鼠心肌分離自心臟組織；心臟是脊椎動(dòng)物身體中重要的一個(gè)器官，主要功能是為血液流動(dòng)提供壓力，把血液運(yùn)行至身體各個(gè)部分。心臟由心肌構(gòu)成，左心房、左心室、右心房、右心室四個(gè)腔組成。左右心房之間和左右心室之間均由間隔隔開，故互不相通，心房與心室之間有瓣膜（房室瓣），這些瓣膜使血液只能由心房流入心室，而不能倒流。心臟的作用是推動(dòng)血液流動(dòng)，向器官、組織提供充足的血流量，以供應(yīng)氧和各種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，并帶走代謝的終產(chǎn)物（如二氧化碳、無機(jī)鹽、尿素和尿酸等），使細(xì)胞維持正常的代謝和功能。心肌細(xì)胞呈菱形、多邊形等不規(guī)則形狀；細(xì)胞培養(yǎng)2h后開始貼壁，呈梭形；到12h左右，細(xì)胞開始伸出偽足，呈菱形、多角形；細(xì)胞分離培養(yǎng)48h以后，大部分伸出偽足、呈巴掌狀，部分心肌細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)搏動(dòng)；心肌細(xì)胞為終末分化細(xì)胞，在體外不增殖。體外培養(yǎng)的心肌細(xì)胞可保持結(jié)構(gòu)及功能上的某些特點(diǎn)，并具有自發(fā)性節(jié)律搏動(dòng)，且心肌細(xì)胞的培養(yǎng)具有簡(jiǎn)便、定量、重復(fù)性好以及不受神經(jīng)體液因素的影響等特點(diǎn)。利用培養(yǎng)的心肌細(xì)胞在探索非血液動(dòng)力學(xué)因素所致的心肌肥厚的調(diào)節(jié)，研究心肌細(xì)胞的生物力學(xué)、凋亡、受體下調(diào)、缺血預(yù)處理、信號(hào)通路、對(duì)作用于心臟的新藥進(jìn)行篩選并對(duì)其安全性進(jìn)行評(píng)價(jià)以及從培養(yǎng)的心肌細(xì)胞中提取有價(jià)值的生物因子等方面具有廣闊的應(yīng)用前景，對(duì)于研究其生理功能、藥物作用以及各種致病因素作用下的病理生理改變具重要意義。

方法簡(jiǎn)介：

公司實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠心肌經(jīng)α-Sarcometric actin免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

質(zhì)量檢測(cè)：

公司實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠心肌采用膠原酶-聯(lián)合消化法結(jié)合差速貼壁法，并用化學(xué)試劑抑制法篩選制備而來，細(xì)胞總量約為5×105cells/瓶。

培養(yǎng)信息：

包被條件 PLL（0.1mg/ml）

培養(yǎng)基 含FBS、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長(zhǎng)特性 貼壁

細(xì)胞形態(tài) 梭形、多角形

傳代特性 屬于終末分化細(xì)胞；屬于不增殖細(xì)胞群

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

原代細(xì)胞一般傳至10代左右，大部分細(xì)胞衰老死亡，但是有極少數(shù)的細(xì)胞能夠度過“危機(jī)"而繼續(xù)傳下去，存活的細(xì)胞一般能夠傳到40-50代，叫細(xì)胞株。當(dāng)50代以后又會(huì)出現(xiàn)“危機(jī)"，這時(shí)有部分細(xì)胞的遺傳物質(zhì)發(fā)生了改變且?guī)в邪┳兊奶攸c(diǎn)，從而可能無限制地傳代下去，稱為細(xì)胞系。

也有認(rèn)為細(xì)胞系指原代細(xì)胞培養(yǎng)物經(jīng)傳代成功后所繁殖的細(xì)胞群體。也指可長(zhǎng)期連續(xù)傳代的培養(yǎng)細(xì)胞。由此便引申出了后來的有限細(xì)胞系、無限細(xì)胞系，因此，細(xì)胞系狹義的是指可連續(xù)傳代的細(xì)胞，廣義是指可傳代的細(xì)胞。而細(xì)胞株是通過選擇法或克隆形成法，從原代培養(yǎng)物或細(xì)胞系中獲得具有特殊性質(zhì)或標(biāo)志物的單一細(xì)胞稱為細(xì)胞株。

細(xì)胞系具有容易培養(yǎng)、種類多、價(jià)格便宜、無限傳代等優(yōu)點(diǎn)，也非常容易在培養(yǎng)、凍存中發(fā)生錯(cuò)誤鑒定及交叉污染的問題。

公司正在銷售的產(chǎn)品：

小鼠角化細(xì)胞內(nèi)分泌因子(KAF)/雙調(diào)蛋白(AR)ELISA 試劑盒 96T/48T

Rat perinuclear ai neuophil cytoplasmic aibody (pANCA) ELISA Kit 大鼠抗中性粒細(xì)胞核周抗體(pANCA)ELISA試劑盒

Humanfilameoushemagglinin,FHAELISAKit 人絲狀血球凝集素(FHA)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

Humanai-chorionicgonadoopin-aibody,AhCGAbELISA試劑盒人抗染色體抗體(ai-chromosomeAb)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

植物活性內(nèi)質(zhì)網(wǎng)分離試劑盒10次

Humanα2macroglobulin,α2MGELISAKit人α2巨球蛋白(α2-MG)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

小鼠酯轉(zhuǎn)移蛋白(CETP)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

中文名稱   方法   規(guī)格

小鼠促黃體激素(LH)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

小鼠血管緊張素原(aGT)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

大鼠層粘連蛋白(Laminin)ELISA試劑盒 ，英文名： Laminin ELISA Kit

Mouse macrophage derived chemokine (MDC/CCL22) ELISA Kit 小鼠巨噬細(xì)胞來源的趨化因子(MDC/CCL22)ELISA試劑盒

Mousethioredoxieductase,xRELISAKit 小鼠硫氧還蛋白還原酶(xR)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

CLIAKitforHumanox-LDLELISAKit人氧化低密度脂蛋白規(guī)格：48T/96T

同位素核酸(PCR產(chǎn)物)蛋白結(jié)合DNA酶足跡法分析試劑盒10次

ELISAKitLFA-3/CD58大鼠淋巴細(xì)胞功能相關(guān)抗原3規(guī)格：48T/96T

ENG重組人 Endoglin / CD105 / ENG 蛋白 (Fc 標(biāo)簽) Protein

去唾液酸糖蛋白受體1(ASGPR1)重組蛋白 Recombinant Asialoglycoprotein Receptor 1 (ASGR1)

STMN1重組人 STMN1 / Stathmin 1 蛋白 (His 標(biāo)簽) Protein

EFNB2 Protein Human 重組人 Ephrin-B2 / EFNB2 蛋白 (His 標(biāo)簽)

NA Protein H5N1 重組甲型流感 H5N1 (A/Hubei/2011) 神經(jīng)酸酶 (Neuraminidase / NA) (高活性) (His 標(biāo)簽)

小鼠心肌細(xì)胞去唾液酸糖蛋白受體1(ASGPR1)重組蛋白 Recombinant Asialoglycoprotein Receptor 1 (ASGR1)

EFNB2 Protein Human 重組人 Ephrin-B2 / EFNB2 蛋白 (His 標(biāo)簽)

ENG重組人 Endoglin / CD105 / ENG 蛋白 (Fc 標(biāo)簽) Protein

NA Protein H5N1 重組甲型流感 H5N1 (A/Hubei/2011) 神經(jīng)酸酶 (Neuraminidase / NA) (高活性) (His 標(biāo)簽)

STMN1重組人 STMN1 / Stathmin 1 蛋白 (His 標(biāo)簽) Protein

原代細(xì)胞培養(yǎng)的具體步驟：

1、準(zhǔn)備：取各種已消毒的培養(yǎng)用品置于凈化臺(tái)面，紫外線消毒20分鐘。開始工作前先洗手、75%酒精擦拭手至肘部。

2、布局：點(diǎn)燃酒精燈，安裝吸管帽。

3、處理組織：把組織塊置于燒杯中，用Hanks液漂洗2-3次，去除血污；如懷疑組織可能污染，可先置于含有青的混合液中30-60分鐘。

5、消化：或用恒溫水浴，或置于37℃溫箱消化均可，消化中每隔20分鐘應(yīng)搖動(dòng)一次，如用電磁恒溫?cái)嚢杵飨?。消化時(shí)間依組織塊的大小和組織的硬度而定。

6、分離：在消化過程中見消化液發(fā)混濁時(shí)，可用吸管吸出少許消化液在鏡下觀察，如組織已分散成細(xì)胞團(tuán)或單個(gè)細(xì)胞，立即終止消化，隨即通過適宜不銹鋼篩，濾掉尚未充分消化開的組織塊。低速（500-1000轉(zhuǎn)/分）離心消化液5分鐘，吸出上清，加入適量含有血清的培養(yǎng)液。

7、計(jì)數(shù)：用計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)，如細(xì)胞懸液細(xì)胞密度過大，再補(bǔ)加培養(yǎng)液調(diào)整后，分裝入培養(yǎng)瓶中。對(duì)大多數(shù)細(xì)胞來說，pH要求在7.2-7.4范圍，培養(yǎng)液呈微紅色，如顏色偏黃，說明液體變酸，可用NaHCO3調(diào)整。

8、培養(yǎng)：置于37℃溫箱培養(yǎng)，如用CO2溫箱培養(yǎng)，瓶口需用紗布棉塞或螺旋帽堵塞，紗布塞易生霉菌，每次換液時(shí)需要換新塞。