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上海聯(lián)邁生物工程有限公司
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更新時(shí)間:2018-06-11 21:15:23瀏覽次數(shù):466次
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酸洗玻璃珠(直徑:200μm)本產(chǎn)品是用濃酸充分洗滌后的玻璃珠,它是玻璃珠法破碎細(xì)菌和真菌的*成分,主要用于從具有堅(jiān)硬外壁的微生物細(xì)胞(如真菌孢子、酵母細(xì)胞、結(jié)核細(xì)胞等)中提取DNA、RNA和蛋白質(zhì)大分子,因?yàn)橛闷渌椒ǎ附夥椒ǘ己茈y沉底破碎具有堅(jiān)硬外壁的微生物細(xì)胞。本產(chǎn)品具有下列特點(diǎn):
1. 經(jīng)過充分的酸洗,免去用戶接觸具有腐蝕性的濃酸。
酸洗玻璃珠(直徑:200μm)
名稱 | 規(guī)格 | 價(jià)格 | 手冊(cè) |
酸洗玻璃珠(直徑:200μm) | 10g | 詢價(jià) |
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本產(chǎn)品是用濃酸充分洗滌后的玻璃珠,它是玻璃珠法破碎細(xì)菌和真菌的*成分,主要用于從具有堅(jiān)硬外壁的微生物細(xì)胞(如真菌孢子、酵母細(xì)胞、結(jié)核細(xì)胞等)中提取DNA、RNA和蛋白質(zhì)大分子,因?yàn)橛闷渌椒?,包括酶解方法都很難沉底破碎具有堅(jiān)硬外壁的微生物細(xì)胞。本產(chǎn)品具有下列特點(diǎn):
1. 經(jīng)過充分的酸洗,免去用戶接觸具有腐蝕性的濃酸。
2. 用本產(chǎn)品破碎具有堅(jiān)硬外壁的微生物細(xì)胞,屬于物理方法,不但比溫和的化學(xué)破壁法普適性更好、重復(fù)性更好,同時(shí)不需要使用酶,因此不容易被酶中的外源核酸或蛋白質(zhì)污染。
3. 用玻璃珠破碎法提取酸洗玻璃珠(直徑:200μm)一個(gè)樣品只需要10余分鐘時(shí)間,非??旖荨W⒁猓罕井a(chǎn)品需要跟本公司提供的裂解液、上柱液、離心吸附柱等配合使用才能用于核酸純化。
4. 一次可以處理5 mL的微生物樣品。
5. 本系列產(chǎn)品有各種規(guī)格、適用于不同材料。
RNA提取法:試劑中的主要成分為異硫氰酸胍和苯酚,其中異硫氰酸胍可裂解細(xì)胞,促使核蛋白體的解離,使RNA與蛋白質(zhì)分離,并將RNA釋放到溶液中。當(dāng)加入氯時(shí),它可抽提酸性的苯酚,而酸性苯酚可促使RNA進(jìn)入水相,酸洗玻璃珠(直徑:200μm)離心后可形成水相層和有機(jī)層,這樣RNA與仍留在有機(jī)相中的蛋白質(zhì)和DNA分離開。水相層(無色)主要為RNA,有機(jī)層(黃色)主要為DNA和蛋白質(zhì)。
實(shí)驗(yàn)步驟:
1、RNA的提取;
2、反轉(zhuǎn)錄合成cDNA;
3、PCR擴(kuò)增;
4、產(chǎn)物的電泳和結(jié)果的測(cè)定。
RT-PCR是將RNA的反轉(zhuǎn)錄(RT)和cDNA的聚合酶鏈?zhǔn)綌U(kuò)增(PCR)相結(jié)合的技術(shù)。首先經(jīng)反轉(zhuǎn)錄酶的作用從RNA合成 cDNA,再以cDNA為模板,擴(kuò)增合成目的片段。RT-PCR可以一步法或兩步法的形式進(jìn)行。在兩步法RT-PCR中,每一步都在zui條件下進(jìn)行。
堿變性提取質(zhì)粒DNA是基于染色體DNA與質(zhì)粒DNA的變性與復(fù)性的差異而達(dá)到分離目的。在pH高達(dá)12.6的堿性條件下,染色體DNA的氫鍵斷裂,雙螺旋結(jié)構(gòu)解開而變性。質(zhì)粒DNA的大部分氫鍵也斷裂,但超螺旋共價(jià)閉合環(huán)狀的兩條互補(bǔ)鏈不會(huì)*分離,當(dāng)以pH4.8的NaAc高鹽緩沖液去調(diào)節(jié)其pH至中性時(shí),變性的質(zhì)粒DNA又恢復(fù)原來的構(gòu)型,保存在溶液中,而染色體DNA不能復(fù)性而形成纏連的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu),通過離心,染色體DNA與不穩(wěn)定的大分子RNA、蛋白質(zhì)-SDS復(fù)合物等一起沉淀下來而被除去。
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