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上海閃晶分子生物科技有限公司
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更新時間：2023-05-10 09:27:34瀏覽次數(shù)：221次
聯(lián)系我時，請告知來自 環(huán)保在線因PCR是一種極敏感的擴增技術(shù)，易受污染的影響。小量的外源 DNA 污染可以與目的模板一塊被擴增。當(dāng)前一次擴增產(chǎn)物用來進行新的擴增反應(yīng)時，會發(fā)生共同來源的污染，這稱之為殘余污染；從其他樣品中純化的 DNA 或克隆的 DNA 也會是污染源。衛(wèi)生部已經(jīng)明確規(guī)定，凡是用于臨床檢驗的PCR試劑，都應(yīng)該有 UNG酶技術(shù)，以防止污染。
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UNG酶用途
因PCR是一種極敏感的擴增技術(shù)，易受污染的影響。小量的外源 DNA 污染可以與目的模板一塊被擴增。當(dāng)前一次擴增產(chǎn)物用來進行新的擴增反應(yīng)時，會發(fā)生共同來源的污染，這稱之為殘余污染；從其他樣品中純化的 DNA 或克隆的 DNA 也會是污染源。衛(wèi)生部已經(jīng)明確規(guī)定，凡是用于臨床檢驗的PCR試劑，都應(yīng)該有 UNG酶技術(shù)，以防止污染。
控制污染的方法主要有兩種：
1 、在 PCR 實驗過程中使用良好的實驗步驟和實驗環(huán)境減少殘余污染：使用抗氣霧劑移液管的阻止氣霧劑進入 eppendorf 管內(nèi)；為 PCR 樣品配制和擴增后分析設(shè)計隔離的區(qū)域；在準(zhǔn)備新反應(yīng)前更換手套；總是使用不含有模板的陰性對照檢測污染；使用預(yù)先混合的反應(yīng)成分，而不是每個反應(yīng)的每個試劑單獨加入。
• 使用UDG酶），這種酶移除 DNA 中的，在PCR反應(yīng)液配制時，將dUTP和dTTP 按一定的比例混用，使得擴增產(chǎn)物含有脫氧，這種產(chǎn)物對 UNG 敏感，所有可以在PCR前對新配制的反應(yīng)用 UNG 處理以破壞殘余產(chǎn)物，杜絕污染。
UNG酶特征
• 克隆有 Thermu aquaticus DNA Polymerase 基因的大腸桿菌經(jīng)誘導(dǎo)表達后，再經(jīng)三次過柱純化分離出來的重組蛋白。
• 50ul 體系中，加入0.1U的UNG酶，能夠消除 10 7 帶有 dUTP 的、大于 6 個堿基的雙鏈DNA 污染。
• 反應(yīng)條件： 37℃ ，2分鐘；反應(yīng) buffer: 20mM Tris-HCl(PH:8.0); 1mM EDTA; 1mM DTT;60度以上可以滅活。
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