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更新時間：2018-06-14 13:48:08瀏覽次數(shù)：304次
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克必隆常態(tài)轉(zhuǎn)化液是LMAI Bio推出的具有自主知識產(chǎn)權(quán)的革命性產(chǎn)品，它能使各種常態(tài)的E.coli細胞直接用于快速轉(zhuǎn)化實驗，使廣大用戶不再因為簡單的轉(zhuǎn)化實驗而再為感受態(tài)細胞的制備，保存和運輸?shù)确爆嵉氖虑槎傩?，大大地縮短了基因克隆實驗的時間，提高使用者的工作效率。
1. 不需專門制備感受態(tài)細胞，直接使用常態(tài)的細胞進行質(zhì)粒轉(zhuǎn)化，隨用隨配，十分方便。常態(tài)細胞包括新鮮培養(yǎng)的菌液，新
克必隆常態(tài)轉(zhuǎn)化液
名稱 | 規(guī)格 | 價格 | 手冊 |
克必隆常態(tài)轉(zhuǎn)化液 | 20次 | 詢價 |
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是LMAI Bio新推出的具有自主知識產(chǎn)權(quán)的革命性產(chǎn)品，它能使各種常態(tài)的E.coli細胞直接用于快速轉(zhuǎn)化實驗，使廣大用戶不再因為簡單的轉(zhuǎn)化實驗而再為感受態(tài)細胞的制備，保存和運輸?shù)确爆嵉氖虑槎傩?，大大地縮短了基因克隆實驗的時間，提高使用者的工作效率。
1. 不需專門制備感受態(tài)細胞，直接使用常態(tài)的細胞進行質(zhì)粒轉(zhuǎn)化，隨用隨配，十分方便。常態(tài)細胞包括新鮮培養(yǎng)的菌液，新鮮的或4℃放置數(shù)月的培養(yǎng)基菌落，甘油菌種保存液等。
2. 適用菌種和質(zhì)粒廣泛，用過的E.coli菌種包括K12系的DH5α和Tg1，B系的BL21（DE3）。用過的質(zhì)粒有pGEM，pET和克必隆系列等。
3. 轉(zhuǎn)化效率適中，使用10 ng質(zhì)粒轉(zhuǎn)化一般能得到上萬個轉(zhuǎn)化子）效率在105到106 CFU/μg質(zhì)粒之間），使用3-5 μL連接液轉(zhuǎn)化一般能得幾千個轉(zhuǎn)化子，足夠篩選重組子使用（但不適合構(gòu)建文庫）。
4. 單管快速操作，整個操作可以在一個1.5 mL塑料離心管中進行，短可以在三十分鐘內(nèi)完成，不需要過夜細菌培養(yǎng)，熱休克處理甚至恒溫搖床，極其適用于自動化的大規(guī)模克隆篩選工作。
5. 穩(wěn)定性好，本可以在-20℃條件下長期保存而不用擔(dān)心轉(zhuǎn)化效率的降低，而感受態(tài)細胞在同樣條件下會迅速失去活性。
RNA提取法：試劑中的主要成分為異硫氰酸胍和苯酚，其中異硫氰酸胍可裂解細胞，促使核蛋白體的解離，使RNA與蛋白質(zhì)分離，并將RNA釋放到溶液中。當(dāng)加入氯時，它可抽提酸性的苯酚，而酸性苯酚可促使RNA進入水相，離心后可形成水相層和有機層，這樣RNA與仍留在有機相中的蛋白質(zhì)和DNA分離開。水相層(無色)主要為RNA，有機層(黃色)主要為DNA和蛋白質(zhì)。
實驗步驟：
1、RNA的提取;
2、反轉(zhuǎn)錄合成cDNA;
3、PCR擴增;
4、產(chǎn)物的電泳和結(jié)果的測定。
RT-PCR是將RNA的反轉(zhuǎn)錄(RT)和cDNA的聚合酶鏈式擴增(PCR)相結(jié)合的技術(shù)。首先經(jīng)反轉(zhuǎn)錄酶的作用從RNA合成 cDNA，再以cDNA為模板，擴增合成目的片段。RT-PCR可以一步法或兩步法的形式進行。在兩步法RT-PCR中，每一步都在zui條件下進行。
堿變性提取質(zhì)粒DNA是基于染色體DNA與質(zhì)粒DNA的變性與復(fù)性的差異而達到分離目的。在pH高達12.6的堿性條件下，染色體DNA的氫鍵斷裂，雙螺旋結(jié)構(gòu)解開而變性。質(zhì)粒DNA的大部分氫鍵也斷裂，但超螺旋共價閉合環(huán)狀的兩條互補鏈不會*分離，當(dāng)以pH4.8的NaAc高鹽緩沖液去調(diào)節(jié)其pH至中性時，變性的質(zhì)粒DNA又恢復(fù)原來的構(gòu)型，保存在溶液中，而染色體DNA不能復(fù)性而形成纏連的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，通過離心，染色體DNA與不穩(wěn)定的大分子RNA、蛋白質(zhì)-SDS復(fù)合物等一起沉淀下來而被除去。
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