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更新時間:2018-06-15 12:08:21瀏覽次數(shù):261次
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動物細(xì)胞裂解液A(非變性)本產(chǎn)品含有多種細(xì)胞裂解成分和蛋白酶抑制成分,可以在非變性或變性條件下迅速裂解組織或培養(yǎng)細(xì)胞,使之釋放出細(xì)胞內(nèi)蛋白,用于后續(xù)實驗。它具有以下優(yōu)點:
1. 快速裂解,多種裂解成分經(jīng)過精心優(yōu)化,能快速使細(xì)胞裂解。
動物細(xì)胞裂解液A(非變性)
名稱 | 規(guī)格 | 價格 | 手冊 |
動物細(xì)胞裂解液A(非變性) | 50mL | 詢價 |
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本產(chǎn)品含有多種細(xì)胞裂解成分和蛋白酶抑制成分,可以在非變性或變性條件下迅速裂解組織或培養(yǎng)細(xì)胞,使之釋放出細(xì)胞內(nèi)蛋白,用于后續(xù)實驗。它具有以下優(yōu)點:
1. 快速裂解,多種裂解成分經(jīng)過精心優(yōu)化,能快速使細(xì)胞裂解。
2. 非變性(80807A)產(chǎn)品能地保留蛋白天然結(jié)構(gòu)和功能,適用于Western Blot、免疫沉淀、免疫共沉淀、蛋白活性檢測(信號傳遞研究和酶動力學(xué)檢測)等各種研究。
3. 變性(80807B)裂解細(xì)胞的效率更高,適用于Western Blotting和對抗原空間構(gòu)型不敏感的免疫共沉淀研究。
4. 適用于培養(yǎng)細(xì)胞(包括懸浮細(xì)胞)和新鮮組織。
RNA提取法:試劑中的主要成分為異硫氰酸胍和苯酚,其中異硫氰酸胍可裂解細(xì)胞,促使核蛋白體的解離,使RNA與蛋白質(zhì)分離,并將RNA釋放到溶液中。當(dāng)加入氯時,它可抽提酸性的苯酚,而酸性苯酚可促使RNA進(jìn)入水相,離心后可形成水相層和有機層,這樣RNA與仍留在有機相中的蛋白質(zhì)和DNA分離開。水相層(無色)主要為RNA,有機層(黃色)主要為DNA和蛋白質(zhì)。
實驗步驟:
1、RNA的提取;
2、反轉(zhuǎn)錄合成cDNA;
3、PCR擴增;
4、產(chǎn)物的電泳和結(jié)果的測定。
RT-PCR是將RNA的反轉(zhuǎn)錄(RT)和cDNA的聚合酶鏈?zhǔn)綌U增(PCR)相結(jié)合的技術(shù)。首先經(jīng)反轉(zhuǎn)錄酶的作用從RNA合成 cDNA,再以cDNA為模板,擴增合成目的片段。RT-PCR可以一步法或兩步法的形式進(jìn)行。在兩步法RT-PCR中,每一步都在zui條件下進(jìn)行。
堿變性提取質(zhì)粒DNA是基于染色體DNA與質(zhì)粒DNA的變性與復(fù)性的差異而達(dá)到分離目的。在pH高達(dá)12.6的堿性條件下,染色體DNA的氫鍵斷裂,雙螺旋結(jié)構(gòu)解開而變性。質(zhì)粒DNA的大部分氫鍵也斷裂,但超螺旋共價閉合環(huán)狀的兩條互補鏈不會*分離,當(dāng)以pH4.8的NaAc高鹽緩沖液去調(diào)節(jié)其pH至中性時,變性的質(zhì)粒DNA又恢復(fù)原來的構(gòu)型,保存在溶液中,而染色體DNA不能復(fù)性而形成纏連的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu),通過離心,染色體DNA與不穩(wěn)定的大分子RNA、蛋白質(zhì)-SDS復(fù)合物等一起沉淀下來而被除去。
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