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上海博湖生物科技有限公司
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PCR出現(xiàn)非特異性擴增帶原因與對策
2023-6-12 閱讀(1033)
PCR擴增后出現(xiàn)的條帶與預(yù)計的大小不一致，或大或小，或者同時出現(xiàn)特異性擴增帶 與非特異性擴增帶。非特異性條帶的出現(xiàn)，其原因：
1、引物與靶序列不wan全互補、或引物聚合形成二聚體。
2、Mg2+離子濃度過高、退火溫度過低，及PCR循環(huán)次數(shù)過多有關(guān)。其次，是酶的質(zhì)和量，往往一些來源的酶易出現(xiàn)非特異條帶而另一來源的酶則不出現(xiàn)，酶的量過多有時也會出現(xiàn)非特異性擴增。
其對策有：
①必要時，重新設(shè)計引物。
②減低酶的量或調(diào)換另一來源的酶。
③降低引物量，適當(dāng)增加模板量，減少循環(huán)次數(shù)。
④適當(dāng)提高退火溫度或采用二溫度點法(93℃變性，65℃左右退火與延伸，也叫兩步法)。
