 |
上海博湖生物科技有限公司
主營產(chǎn)品： 高密度脂蛋白ELISA檢測試劑盒,同型半胱氨酸ELISA檢測試劑盒,游離脂肪酸ELISA檢測試劑盒 |
聯(lián)系電話
18117197628
公司信息
- 聯(lián)系人：
- 陳經(jīng)理
- 電話：
- 021-57763112
- 手機(jī)：
- 18117197628
- 售后電話：
- 18117197628
- 傳真：
- 86-021-57690166
- 地址：
- 上海閔行區(qū)碧泉路36弄銀宵大廈B102
- 郵編：
- 200000
- 個性化：
- www.shbhbio-e.com
PCR實(shí)驗預(yù)準(zhǔn)備事項
2023-12-11 閱讀(338)
實(shí)時熒光定量PCR技術(shù)，是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號積累實(shí)時監(jiān)測整個PCR進(jìn)程，最后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知模板進(jìn)行定量分析的方法。PCR實(shí)驗是分子生物學(xué)中常見用的實(shí)驗之一，在基因擴(kuò)增、核酸檢測、基因檢測等方面廣泛應(yīng)用。PCR實(shí)驗前的準(zhǔn)備:
在開始PCR實(shí)驗之前，必須準(zhǔn)備好DNA模板（基因組DNA或逆轉(zhuǎn)錄制備的cDNA）、特異性引物（自己設(shè)計或用軟件設(shè)計），并選擇合適的商業(yè)酶（選擇符合您實(shí)驗?zāi)康牡拿?span style="font-size: 14px; box-sizing: border-box;">)
2、引物的特異性影響 PCR 成功的概率，良好的引物設(shè)計對 PCR 擴(kuò)增的成功至關(guān)重要。當(dāng)您開始設(shè)計引物時，應(yīng)仔細(xì)考慮以下幾個原則：
①引物的長度。PCR引物一般在18-22bp左右。這對于引物特異性和在退火溫度下的結(jié)合來說是足夠長的。
②熔化溫度(Tm)。Tm 定義為在此溫度下，DNA 雙鏈體的一半將解離成單鏈 DNA。52-58C 范圍內(nèi)的引物 Tm 是最佳的。
③GC 含量。最佳 GC 含量應(yīng)為 40-60%。
④許多軟件可用于引物設(shè)計，例如primer5和Oligo。這些軟件推薦的引物通常可以滿足我們的需求。
