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上海博湖生物科技有限公司
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一抗二抗選擇參照要點(diǎn)
2024-1-15 閱讀(314)
1、一抗選擇要點(diǎn)
（1）、確定抗體的名字，注意中英文名字、它名、亞型等信息。
（2）、確定你的實(shí)驗(yàn)類型，Elisa，WB，IHC，ICC，還是FACS。一般抗體的說(shuō)明書(shū)都會(huì)列出該抗體經(jīng)驗(yàn)證過(guò)適用于何種實(shí)驗(yàn)的類型，如果抗體說(shuō)明 書(shū)沒(méi)有提及的應(yīng)用類型，并不意味著該抗體不適用于此種分析應(yīng)用類型，而僅是說(shuō)明尚未經(jīng)過(guò)此種實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，請(qǐng)根據(jù)說(shuō)明書(shū)列出的已驗(yàn)證的類型來(lái)選擇適合你實(shí)驗(yàn)的 抗體。
（3）、確定實(shí)驗(yàn)樣本的種屬，Human，Mouse，還是Rat。一般抗體說(shuō)明書(shū)都列出該抗體經(jīng)試驗(yàn)驗(yàn)證過(guò)適用于何種物種實(shí)驗(yàn)，請(qǐng)根據(jù)說(shuō)明書(shū)列出已驗(yàn)證的種屬來(lái)選擇適合你實(shí)驗(yàn)的抗體。
（4）、樣本蛋白的結(jié)構(gòu)性質(zhì)。了解樣本蛋白的結(jié)構(gòu)性質(zhì)有助于選擇最合適的抗體，待測(cè)樣本蛋白的結(jié)構(gòu)域和樣本在提取和處理過(guò)程中是否會(huì)變性，蛋白空間構(gòu)象的改變，會(huì)影響抗體的免疫親和反應(yīng)。
（5）、單多克隆抗體的選擇。市面上的抗體還是以多克隆抗體為主，一般單克隆抗體特異性強(qiáng)，但親和力相對(duì)小，檢測(cè)抗原靈敏度相對(duì)就低；而多克隆抗體特異性稍弱，但抗體的親和力強(qiáng)，靈敏度高，但易出現(xiàn)非特異性染色（可以通過(guò)封閉等避免）。
2. 二抗選擇要點(diǎn)
（1）、種屬來(lái)源。主要根據(jù)一抗種屬來(lái)源來(lái)決定購(gòu)買(mǎi)二抗來(lái)源，如一抗是小鼠來(lái)源，那二抗就買(mǎi)抗小鼠的即可（羊、兔等均可）。
（2）、標(biāo)記物的選擇。有HRP、Biotin、熒光素等標(biāo)記物。一般SP三步法二抗選擇Biotin標(biāo)記的二抗，以與后面的SP結(jié)合反應(yīng)，而免疫熒光染色就需要購(gòu)買(mǎi)不同熒光素標(biāo)記的二抗，如羅丹明、FITC、Cy3等常用熒光素。
