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上海博湖生物科技有限公司
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抗體的制備概述
2025-1-20 閱讀(136)
1、多克隆抗體的制備：
①免疫方法：對(duì)多克隆抗體，免疫方法一般有皮下或肌肉免疫法、皮內(nèi)免疫法、淋巴結(jié)免疫法和混合法等。一般來說，皮下或肌肉免疫法產(chǎn)生的抗體比較多；皮內(nèi)免疫法所需的抗原量少，在抗原寶貴時(shí)特別適用，但與之相對(duì)的，它產(chǎn)生的抗體量也不多?；旌厦庖叻ǖ膬?yōu)點(diǎn)是抗原用量小，產(chǎn)生抗體速度快。
②多克隆抗體的制備：將抗原免疫動(dòng)物（常用的動(dòng)物為兔、羊、狗等），分離出抗血清并純化抗體。多克隆抗體的均一性較差，其特異性相對(duì)較低，因此，多克隆抗體在農(nóng)藥殘留速測(cè)技術(shù)中的應(yīng)用受到一定的限制。但近年來有學(xué)者恰恰利用了多抗的交叉反應(yīng)高的特點(diǎn)，通過制備出具有某類（或某幾種）農(nóng)藥的“共性結(jié)構(gòu)"的半抗原或者通過制備出含多個(gè)抗原決定簇的人工抗原來制備“寬譜特異性"抗體，進(jìn)行農(nóng)藥多殘留分析研究。
2、單克隆抗體的制備：
單克隆抗體制備技術(shù)最初是由K鰄ler和Milstein（1975）利用B淋巴細(xì)胞雜交瘤技術(shù)創(chuàng)立的。目前該技術(shù)已廣泛應(yīng)用于疾病診斷及生物、醫(yī)學(xué)研究、環(huán)境和食品安全檢測(cè)（監(jiān)測(cè)）等方面。單抗均一性高，只和抗原某一決定簇結(jié)合，有更高的特異性，而且，產(chǎn)生抗體的單克隆細(xì)胞可在體外傳代繁殖，不受動(dòng)物免疫時(shí)間限制生產(chǎn)抗體。只要管理和培養(yǎng)技術(shù)正確，抗體就可無限的產(chǎn)生。基本過程是動(dòng)物免疫、細(xì)胞融合、克隆篩選、單克隆抗體性質(zhì)鑒定、腹水誘發(fā)、收集和純化等。
3、重組抗體的制備：
近年來，隨著蛋白質(zhì)技術(shù)及DNA重組技術(shù)的發(fā)展，人們通過對(duì)抗體產(chǎn)生的基因本質(zhì)、基因重組抗體篩選技術(shù)和直接定位誘導(dǎo)基因操縱技術(shù)的研究，獲得用于zhi定空間位置并具有各種特異性、親和性，能忍受一定溫度、pH和有機(jī)溶劑的人工重組抗體。一般是將抗原免疫小鼠，一定時(shí)間后無菌條件下取出小鼠脾臟，提取脾細(xì)胞總RNA，以RNA逆轉(zhuǎn)錄合成的cDNA為模板，PCR擴(kuò)增抗體，將抗體中的輕鏈、重鏈連接成ScFv（single-chainvariablefragment）。酶切經(jīng)PCR擴(kuò)增的ScFv片段，并與噬菌體載體連接，然后以常規(guī)方法轉(zhuǎn)化入大腸桿菌或其他生物體中。人工培養(yǎng)帶有噬菌體抗體的大腸桿菌，即得到重組抗體。該方法生產(chǎn)抗體速度快，可通過誘變改變抗體特性，使抗體的特異性更強(qiáng)，而且，利用這項(xiàng)技術(shù)獲得的噬菌體抗體庫(kù)，能同時(shí)識(shí)別多種農(nóng)藥，可用于農(nóng)藥多殘留免疫速測(cè)技術(shù)的研究。
