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上海博湖生物科技有限公司
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ELISA結(jié)合物的定量測定
2025-3-17 閱讀(76)
ELISA結(jié)合物的定量測定：
一般是對結(jié)合物中的酶和IgG進行定量測定。常用紫外分光光度計于403nm和280nm進行測定，然后按下列公式計算：
酶量(mg/ml)=OD403×0.42
IgG量(mg/ml)=(OD280-OD403×0.4)×0.94×0.62
對于過碘酸鈉氧化法制備的標記抗體量，按下列公式計算：
IgG量(mg/ml)=(OD280-OD403×0.34)×0.62
已知酶量和IgG量后，即可計算出標記抗體的摩爾(mol)比值。
HRP/IgG摩爾比值=HRP(mg/ml)/IgG(mg/ml)×4
結(jié)合物中酶總量=HRP(mg/ml)×結(jié)合物溶液量
結(jié)合物產(chǎn)率=結(jié)合物中酶總量/標記時加入的酶量×100%
用于ELISA的結(jié)合物的酶量為400(g/ml時效果一般，為500(g/ml時效果較好，達 1000(g/ml時效果好。mol.比值由于結(jié)合物中含的IgG并不wan全可靠，所以不能作為主要參數(shù)。一般認為mol.比值為0.7時效果一般，1.0時效果較好，1.5-2.0時最好。酶結(jié)合率為 7%時效果一般，為9%-10%較好，達30%以上時最好。
