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上海博湖生物科技有限公司
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進(jìn)口ELISA試劑盒要求處理的方法
2020-9-29 閱讀(1101)
進(jìn)口ELISA試劑盒實驗原理：
本進(jìn)口ELISA試劑盒采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫法（ELISA）測定標(biāo)本中結(jié)核?。═B）。用純化的牛結(jié)核?。═B）抗體包被微孔板，制成固相抗體，可與樣品中結(jié)核?。═B）相結(jié)合，經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的抗原和其他成分后再與 HRP 標(biāo)記的結(jié)核?。═B）抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過*洗滌后加底物 TMB 顯色。TMB 在 HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色， 并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的黃色。用酶標(biāo)儀在 450nm 波長下測定吸光度（OD 值），與 CUTOFF 值相比較，從而判定標(biāo)本中牛結(jié)核?。═B）的存在與否。
進(jìn)口ELISA試劑盒樣本處理及要求：
血清：室溫血液自然凝固 10-20 分鐘，離心 20 分鐘左右（2000-3000 轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清，保存過程中如出現(xiàn)沉淀，應(yīng)再次離心。
血漿：應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇 EDTA 或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合 10-20 分鐘后，離心20 分鐘左右（2000-3000 轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)該再次離心。
尿液：用無菌管收集，離心 20 分鐘左右（2000-3000 轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行。
細(xì)胞培養(yǎng)上清：檢測分泌性的成份時，用無菌管收集。離心 20 分鐘左右（2000-3000 轉(zhuǎn)/ 分）。仔細(xì)收集上清。檢測細(xì)胞內(nèi)的成份時，用 PBS（PH7.2-7.4）稀釋細(xì)胞懸液，細(xì)胞濃度達(dá)到 100 萬/ml 左右。通過反復(fù)凍融，以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心 20 分鐘左右（2000-3000 轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
組織標(biāo)本：切割標(biāo)本后，稱取重量。加入進(jìn)口ELISA試劑盒一定量的，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。?biāo)本融化后仍然保持 2-8℃的溫度。加入一定量的 PBS（PH7.4），用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分。離心20 分鐘左右（2000-3000 轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。
標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實驗。若不能馬上進(jìn)行試驗，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融.
不能檢測含 NaN3 的樣品，因 NaN3 抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。?
