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上海博湖生物科技有限公司
主營產(chǎn)品： 高密度脂蛋白ELISA檢測(cè)試劑盒,同型半胱氨酸ELISA檢測(cè)試劑盒,游離脂肪酸ELISA檢測(cè)試劑盒 |
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Y2HGold 感受態(tài)細(xì)胞100ul*50操作方法（以下操作均按無菌條件的標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行）
1 取感受態(tài)細(xì)胞置于冰浴中，如需分裝可將剛?cè)诨?xì)胞懸液分裝到無菌預(yù)冷的離心管中，置于冰浴中。
● 一次轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞的建議用量為50-100 μl，可以根據(jù)實(shí)際情況分裝使用。應(yīng)注意所用DNA 體積不要超過感受態(tài)細(xì)胞懸液體積的十分之一。
以下實(shí)驗(yàn)以100 μl感受態(tài)細(xì)胞為例。
Y2HGold 感受態(tài)細(xì)胞100ul*502 向感受態(tài)細(xì)胞懸液中加入目的DNA（100 μl 的感受態(tài)細(xì)胞能夠被1 ng 超螺旋質(zhì)粒DNA 所飽和），輕輕旋轉(zhuǎn)離心管以混勻內(nèi)容物，在冰浴中靜置30 分鐘。
3 將離心管置于42℃水浴中放置60-90 秒，然后快速將管轉(zhuǎn)移到冰浴中，使細(xì)胞冷卻2-3 分鐘，該過程不要搖動(dòng)離心管。
4 向每個(gè)離心管中加入900 μl 無菌的SOC 或LB 培養(yǎng)基（不含抗生素）， 混勻后置于37℃搖床振蕩培養(yǎng)1 小時(shí)（160-220 轉(zhuǎn)/分鐘），目的是使質(zhì)粒上相關(guān)的抗性標(biāo)記基因表達(dá)，使菌體復(fù)蘇。
Y2HGold 感受態(tài)細(xì)胞100ul*505 將離心管內(nèi)容物混勻，吸取100 μl 已轉(zhuǎn)化的感受態(tài)細(xì)胞加到含相應(yīng)抗生素的SOB 或LB 固體瓊脂培養(yǎng)基上，用無菌的彎頭玻棒輕輕的將細(xì)胞均勻涂開。將平板置于室溫直至液體被吸收，倒置平板，37℃培養(yǎng)12-16 小時(shí)。
● 涂布用量可根據(jù)具體實(shí)驗(yàn)來調(diào)整。如轉(zhuǎn)化的DNA 總量較多，可取更少量轉(zhuǎn)化產(chǎn)物涂布平板；反之，如轉(zhuǎn)化的DNA 總量較少，可取200-300 μl 轉(zhuǎn)化產(chǎn)物涂布平板。如果預(yù)計(jì)的克隆較少，可通過離心（4,000 rpm, 2分鐘）后吸除部分培養(yǎng)液，懸浮菌體后將其涂布于一個(gè)平板中。（涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的轉(zhuǎn)化菌落數(shù)過少可以將剩下的菌液再涂布新的培養(yǎng)板）
注意事項(xiàng)
1. 感受態(tài)細(xì)胞應(yīng)保存在 -70℃，不可多次凍融和放置時(shí)間過長，以避免降低感受態(tài)細(xì)胞的轉(zhuǎn)化效率。
2. 進(jìn)行轉(zhuǎn)化操作時(shí)，應(yīng)根據(jù)相應(yīng)溫度及無菌條件的要求進(jìn)行。
3 為防止轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)不成功，可以保留部分連接反應(yīng)液，以重新轉(zhuǎn)化，將損失降到低。
以下是的相關(guān)產(chǎn)品：
RANKL 人核因子κB受體活化因子配基 規(guī)格： 48T/96T
RNASE 人核糖核酸酶 規(guī)格： 48T/96T
Ag-NORs 人核仁形成區(qū)嗜銀蛋白 規(guī)格： 48T/96T
NMP-22 人核基質(zhì)蛋白22 規(guī)格： 48T/96T
LPO 人過氧化脂質(zhì)/乳過氧化物酶 規(guī)格： 48T/96T
PPAR-γ 人過氧化物酶體增殖因子活化受體γ 規(guī)格： 48T/96T
PPARs 人過氧化物酶體增殖因子活化受體 規(guī)格： 48T/96T
PPAR-α 人過氧化物酶體增殖物激活受體α 規(guī)格： 48T/96T
C4a 人過敏毒素/補(bǔ)體片斷4 規(guī)格： 48T/96T
FDA 人果糖1,6二磷酸醛縮酶 規(guī)格： 48T/96T
P-CK 人廣譜細(xì)胞角蛋白 規(guī)格： 48T/96T
Casp-9 人胱天蛋白酶9 規(guī)格： 48T/96T
Casp-3 人胱天蛋白酶3 規(guī)格： 48T/96T
Casp-12 人胱天蛋白酶12 規(guī)格： 48T/96T
oligomeric 人寡聚蛋白 規(guī)格： 48T/96T
ON 人骨粘連蛋白 規(guī)格： 48T/96T
BMP-6 人骨形成蛋白6 規(guī)格： 48T/96T
BMPs 人骨形成蛋白 規(guī)格： 48T/96T
BSP 人骨涎蛋白 規(guī)格： 48T/96T
CTX-2 人骨退化特異標(biāo)志物 規(guī)格： 48T/96T
ALP-B 人骨特異性堿性磷酸酶B 規(guī)格： 48T/96T
MPIF-1/CCL23 人骨髓抑制因子1 規(guī)格： 48T/96T
OPN 人骨橋素 規(guī)格： 48T/96T
Cr 人骨膠原交聯(lián) 規(guī)格： 48T/96T
BALP 人骨堿性磷酸酶 規(guī)格： 48T/96T
OT/BGP 人骨鈣素/骨蛋白 規(guī)格： 48T/96T
BMPR-Ⅱ 人骨成型蛋白受體Ⅱ 規(guī)格： 48T/96T
BMPR-1A 人骨成型蛋白受體1A 規(guī)格： 48T/96T
BMP-7 人骨成型蛋白7 規(guī)格： 48T/96T
BMP-4 人骨成型蛋白4 規(guī)格： 48T/96T
BMP-2 人骨成型蛋白2 規(guī)格： 48T/96T
OPGL 人骨保護(hù)素配體 規(guī)格： 48T/96T
OPG 人骨保護(hù)素 規(guī)格： 48T/96T
GSTpi 人硫轉(zhuǎn)移酶pi基因 規(guī)格： 48T/96T
Y2HGold 感受態(tài)細(xì)胞100ul*50GSH-Px 人過氧化酶 規(guī)格： 48T/96T
GSH 人 規(guī)格： 48T/96T
GAD-Ab 人脫羧酶自身抗體 規(guī)格： 48T/96T
