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上海博湖生物科技有限公司
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更新時間：2024-11-23 12:34:40瀏覽次數(shù)：991
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lNVSc1 感受態(tài)細(xì)胞100ul*10? 操作方法（以下操作均按無菌條件的標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行）
1 取感受態(tài)細(xì)胞置于冰浴中，如需分裝可將剛?cè)诨?xì)胞懸液分裝到無菌預(yù)冷的離心管中，置于冰浴中。
● 一次轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞的建議用量為50-100 μl，可以根據(jù)實際情況分裝使用。應(yīng)注意所用DNA 體積不要超過感受態(tài)細(xì)胞懸液體積的十分之一。
以下實驗以100 μl感受態(tài)細(xì)胞為例。
lNVSc1 感受態(tài)細(xì)胞100ul*10? 2 向感受態(tài)細(xì)胞懸液中加入目的DNA（100 μl 的感受態(tài)細(xì)胞能夠被1 ng 超螺旋質(zhì)粒DNA 所飽和），輕輕旋轉(zhuǎn)離心管以混勻內(nèi)容物，在冰浴中靜置30 分鐘。
3 將離心管置于42℃水浴中放置60-90 秒，然后快速將管轉(zhuǎn)移到冰浴中，使細(xì)胞冷卻2-3 分鐘，該過程不要搖動離心管。
4 向每個離心管中加入900 μl 無菌的SOC 或LB 培養(yǎng)基（不含抗生素）， 混勻后置于37℃搖床振蕩培養(yǎng)1 小時（160-220 轉(zhuǎn)/分鐘），目的是使質(zhì)粒上相關(guān)的抗性標(biāo)記基因表達(dá)，使菌體復(fù)蘇。
lNVSc1 感受態(tài)細(xì)胞100ul*10? 5 將離心管內(nèi)容物混勻，吸取100 μl 已轉(zhuǎn)化的感受態(tài)細(xì)胞加到含相應(yīng)抗生素的SOB 或LB 固體瓊脂培養(yǎng)基上，用無菌的彎頭玻棒輕輕的將細(xì)胞均勻涂開。將平板置于室溫直至液體被吸收，倒置平板，37℃培養(yǎng)12-16 小時。
● 涂布用量可根據(jù)具體實驗來調(diào)整。如轉(zhuǎn)化的DNA 總量較多，可取更少量轉(zhuǎn)化產(chǎn)物涂布平板；反之，如轉(zhuǎn)化的DNA 總量較少，可取200-300 μl 轉(zhuǎn)化產(chǎn)物涂布平板。如果預(yù)計的克隆較少，可通過離心（4,000 rpm, 2分鐘）后吸除部分培養(yǎng)液，懸浮菌體后將其涂布于一個平板中。（涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的轉(zhuǎn)化菌落數(shù)過少可以將剩下的菌液再涂布新的培養(yǎng)板）
注意事項
1. 感受態(tài)細(xì)胞應(yīng)保存在 -70℃，不可多次凍融和放置時間過長，以避免降低感受態(tài)細(xì)胞的轉(zhuǎn)化效率。
2. 進(jìn)行轉(zhuǎn)化操作時，應(yīng)根據(jù)相應(yīng)溫度及無菌條件的要求進(jìn)行。
3 為防止轉(zhuǎn)化實驗不成功，可以保留部分連接反應(yīng)液，以重新轉(zhuǎn)化，將損失降到低。
以下是的相關(guān)產(chǎn)品：
mTOR 人雷帕霉素靶蛋白 規(guī)格： 48T/96T
TH 人羥化酶 規(guī)格： 48T/96T
Tyk-2 人激酶2 規(guī)格： 48T/96T
LAC/LA 人狼瘡抗凝抗體 規(guī)格： 48T/96T
Lyme-IgG 人萊姆IgG 規(guī)格： 48T/96T
VacA 人空泡毒素相關(guān)蛋白A 規(guī)格： 48T/96T
PEB1 人空腸彎曲菌黏附蛋白 規(guī)格： 48T/96T
CC16 人克拉拉細(xì)胞蛋白 規(guī)格： 48T/96T
ENA 人可提取核抗原 規(guī)格： 48T/96T
sTfR 人可溶性轉(zhuǎn)鐵蛋白受體 規(guī)格： 48T/96T
sTRAIL 人可溶性腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體 規(guī)格： 48T/96T
sTNF-R2 人可溶性腫瘤壞死因子受體2 規(guī)格： 48T/96T
sTNF-R1 人可溶性腫瘤壞死因子受體1 規(guī)格： 48T/96T
sTNFαR 人可溶性腫瘤壞死因子α受體 規(guī)格： 48T/96T
Sam 人可溶性粘附分子 規(guī)格： 48T/96T
sPECAM-1 人可溶性血小板內(nèi)皮細(xì)胞粘附分子1 規(guī)格： 48T/96T
SFMC 人可溶性血纖蛋白單體復(fù)合物 規(guī)格： 48T/96T
sVCAM-1 人可溶性血管細(xì)胞粘附分子1 規(guī)格： 48T/96T
sEPCR 人可溶性血管內(nèi)皮細(xì)胞蛋白C受體 規(guī)格： 48T/96T
VEGFR-2/sFLK-1 人可溶性血管內(nèi)皮生長因子受體2 規(guī)格： 48T/96T
sAC 人可溶性腺苷酸環(huán)化酶 規(guī)格： 48T/96T
sCKR 人可溶性細(xì)胞因子受體 規(guī)格： 48T/96T
sICAM-1 人可溶性細(xì)胞間粘附分子1 規(guī)格： 48T/96T
sTREM-1 人可溶性髓系細(xì)胞觸發(fā)受體-1 規(guī)格： 48T/96T
sLR 人可溶性瘦素受體 規(guī)格： 48T/96T
sPL-A2 人可溶性磷脂酶A2 規(guī)格： 48T/96T
sRANKL 人可溶性核因子κB受體活化因子配基 規(guī)格： 48T/96T
sFASL 人可溶性凋亡相關(guān)因子配體 規(guī)格： 48T/96T
sFAS/Apo-1 人可溶性凋亡相關(guān)因子 規(guī)格： 48T/96T
sp185/HER-2 人可溶性蛋白185 規(guī)格： 48T/96T
B7-2/sCD86 人可溶性白細(xì)胞分化抗原86 規(guī)格： 48T/96T
sCD40L 人可溶性白細(xì)胞分化抗原40配體 規(guī)格： 48T/96T
sCD30L 人可溶性白細(xì)胞分化抗原30配體 規(guī)格： 48T/96T
sCD28 人可溶性白細(xì)胞分化抗原28 規(guī)格： 48T/96T
sP-selectin 人可溶性P選擇素 規(guī)格： 48T/96T
sE-selectin 人可溶性E選擇素 規(guī)格： 48T/96T
ENG/sCD105 人可溶性Endoglin 規(guī)格： 48T/96T
sCD44-v9 人可溶性CD44變體9 規(guī)格： 48T/96T
lNVSc1 感受態(tài)細(xì)胞100ul*10? sCD146 人可溶性CD146分子 規(guī)格： 48T/96T
granulysin 人顆粒溶素 規(guī)格： 48T/96T
orphanin
