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中級(jí)會(huì)員 | 第7年

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體外哺乳動(dòng)物細(xì)胞染色體畸變試驗(yàn)儀

時(shí)間:2025/4/28閱讀:31
分享:
  體外哺乳動(dòng)物細(xì)胞染色體畸變試驗(yàn)儀
 
  一、 儀器介紹
 
  實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?/strong>
 
  本試驗(yàn)檢測受試物是否引起培養(yǎng)的哺乳動(dòng)物細(xì)胞染色體畸變,以評(píng)價(jià)受試物致突變的可能性
 
  實(shí)驗(yàn)概述:
 
  在加入和不加入代謝活化系統(tǒng)的條件下,使培養(yǎng)的哺乳動(dòng)物細(xì)胞暴露于受試物中。用中期分裂相阻斷劑(如秋水仙素或秋水仙胺)處理,使細(xì)胞停止在中期分裂相,隨后收獲細(xì)胞,制片,染色,分析染色體畸變。
 
  大部分的致突變劑導(dǎo)致染色單體型畸變,偶有染色體型畸變發(fā)生。雖然多倍體的增加可能預(yù)示著有染色體數(shù)目畸變的可能,但本方法并不適合用于測定染色體的數(shù)目畸變。
 
  應(yīng)用范圍
 
  應(yīng)用于科研、農(nóng)業(yè)、衛(wèi)生、教育、霧霾狀態(tài)可吸入顆粒染毒效果研究等各個(gè)領(lǐng)域
 
  二、試驗(yàn)流程
 
  1)細(xì)胞培養(yǎng)
 
  選擇合適細(xì)胞系,在含血清培養(yǎng)基中培養(yǎng)至對數(shù)生長期。
 
  2)受試物處理
 
  設(shè)置多個(gè)濃度組(需包括細(xì)胞毒性評(píng)估,如50%生長抑制濃度)
 
  陽性對照
 
  陰性對照(溶劑對照)
 
  3.)代謝活化系統(tǒng)(S9混合液)
 
  模擬體內(nèi)代謝,用于檢測需代謝激活的致突變物(如加Aroclor 1254誘導(dǎo)的大鼠肝S9)
 
  4.)采樣時(shí)間
 
  短期處理:1個(gè)細(xì)胞周期(通常24小時(shí),含或不含S9)
 
  長期處理:覆蓋多個(gè)細(xì)胞周期(如48小時(shí))
 
  5)染色體制備
 
  秋水仙素(或秋水仙胺)處理:阻斷中期細(xì)胞。
 
  低滲處理(KCI溶液)使細(xì)胞膨脹。
 
  固定(甲醇:冰醋酸=3:1)后滴片,Giemsa染色。
 
  6)鏡檢分析
 
  顯微鏡下觀察至少200個(gè)中期分裂相,記錄畸變類型和頻率。
 
  三、儀器與試劑
 
  關(guān)鍵儀器:
 
  培養(yǎng)箱、生物安全柜、離心機(jī)、顯微鏡(配備油鏡和圖像分析系統(tǒng))
 
  染色體自動(dòng)掃描儀(可選)
 
  主要試劑:
 
  細(xì)胞培養(yǎng)基、胎牛血清。
 
  秋水仙素、Giemsa染液、S9混合液。
 
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